డైరెక్ట్ RT-qPCR కిట్
వివరణ
డైరెక్ట్ RT-qPCR కిట్ విడిగా ప్యాక్ చేయబడిన RT-qPCR బఫర్ మరియు అధిక సమర్థవంతమైన ఎంజైమ్ను అందిస్తుందిమిశ్రమం (Taq, M-MLV, RI), బ్యాక్ ఎండ్ కిట్లు మరియు సిస్టమ్ను రూపొందించడానికి ఇది సౌకర్యవంతంగా ఉంటుందిసర్దుబాటు, సాధారణ ధృవీకరణలో.
స్పెసిఫికేషన్లు
500T, 50,000T
కిట్ భాగాలు
కిట్ కంటెంట్లు (20 μL ప్రతిచర్య వ్యవస్థ) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
500 టి | 50,000 T | |
డైరెక్ట్ ఎంజైమ్ మిశ్రమం | 500 μL× 1 | 50 మి.లీ× 1 |
2× డైరెక్ట్ RT-qPCR బఫర్ | 1 మి.లీ× 5 | 500 మి.లీ× 1 |
సూచన | 1 | 1 |
ఆపరేటింగ్ దశలు
రియాజెంట్ తయారీకి ముందు, కిట్లోని అన్ని రియాజెంట్లను గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద కరిగించి, మెత్తగా కలపాలి.
A: సిద్ధం of టెంప్లేట్ మరియు కారకం
1. సిద్ధం చేసిన RNA టెంప్లేట్ (RNA టెంప్లేట్ను సంగ్రహించడానికి మరియు శుద్ధి చేయడానికి ఫోర్జీన్ టోటల్ RNA ఐసోలేషన్ కిట్ సిరీస్ కిట్ని ఉపయోగించమని సిఫార్సు చేయబడింది) లేదా నమూనా క్రాకింగ్ ఉత్పత్తి (ఫోరేజీన్ లైసిస్ సిస్టమ్ని ఉపయోగించడానికి ఇది సిఫార్సు చేయబడింది), నిర్దిష్ట ప్రైమర్లు (10 μM) మరియు ఇతర సంబంధిత వినియోగ వస్తువులు, పరికరాన్ని సిద్ధం చేయండి.
2. 2× డైరెక్ట్ RT-qPCR బఫర్, RNase-Free ddH2O మరియు 20× ROX రిఫరెన్స్ డై (అయితే'లు అవసరం) మంచుతో కూడిన పెట్టెలో, వీటిని సహజంగా కరిగించి, సున్నితంగా కలపాలి.
B: సిద్ధం of RT-qPCR వ్యవస్థ
పట్టిక 1 : సిద్ధం of RT-qPCR sవ్యవస్థ
భాగం | వాల్యూమ్ | చివరి ఏకాగ్రత |
2× డైరెక్ట్ RT-qPCR బఫర్ | 10 μL | 1× |
డైరెక్ట్ ఎంజైమ్ మిశ్రమం | 1μL | |
ఫార్వర్డ్ ప్రైమర్ (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
రివర్స్ ప్రైమర్ (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
ప్రోబ్(4 μM) | 1μL | 200nM |
మూస(RNA లేదా లైసేట్) | X μL | |
20×ROX రిఫరెన్స్ డై | - | 1* |
RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
మొత్తం వాల్యూమ్ | 20μL |
C: సెట్ ది RT-qPCR స్పందన కార్యక్రమం
పట్టిక 2 : RT-qPCR రియాక్టీon కార్యక్రమం అమరిక (కోసం ఉదాహరణ: రెండు-అడుగు పద్ధతి)
దశ | ఉష్ణోగ్రత | సమయం | సైకిళ్లు | విషయము | |
1 | 50℃ | 15 నిమి | 1* | 1 | రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్షన్ |
2 | 95℃ | 1 నిమిషం | 1 | ప్రీ-డినాటరేషన్ | |
3 | 95℃ | 10 సె | 40-45 | డీనాటరేషన్ | |
60℃ | 30 సెకను 2* | అన్నేల్/ఎక్స్టెన్షన్ |
నిల్వ మరియు షెల్ఫ్ జీవితం
-కిట్ -20 వద్ద నిల్వ చేయాలి± 5℃.చెల్లుబాటు వ్యవధి 12 నెలలు.
-రిపీట్ ఫ్రీజ్-థా సైకిల్స్ (<5 సైకిల్స్) మానుకోండి.