1. 5 కంటే ఎక్కువ ఆర్‌ఎన్‌ఏల ఫంక్షన్‌లను పేర్కొనండి?
RNA tRNA బదిలీ అమైనో ఆమ్లం రైబోజోమ్ RNA rRNA రైబోజోమ్ మెసెంజర్ RNA mRNA ప్రోటీన్ సంశ్లేషణ టెంప్లేట్ వైవిధ్యమైన న్యూక్లియర్ RNA hnRNA పరిపక్వ mRNA యొక్క పూర్వగామి చిన్న అణు RNA snRNA చిన్న సైటోప్లాస్మిక్ RNA స్ప్లికింగ్‌లో పాల్గొంటుంది చిన్న సైటోప్లాస్మిక్-ఆర్ఎన్ఎ సిగ్నలైజ్డ్ స్మాల్ సైటోప్లాస్మిక్ రీఆర్ఎన్ఎ సిగ్నలైజ్డ్ జ్ఞాన శరీర భాగాలు యాంటిసెన్స్ RNA anRNA/micRNA జన్యు వ్యక్తీకరణను నియంత్రిస్తుంది Ribozyme RNA ఎంజైమాటిక్ యాక్టివ్ RNA
2. ప్రొకార్యోటిక్ మరియు యూకారియోటిక్ ప్రమోటర్ల మధ్య ప్రధాన తేడా ఏమిటి?
ప్రొకార్యోటిక్ TTGACA --- TATAAT------ఇనిషియేషన్ సైట్-35 -10 యూకారియోటిక్ ఎన్‌హాన్సర్---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-ఇనిషియేషన్ సైట్-110 -70 -25
3. సహజ ప్లాస్మిడ్ల కృత్రిమ నిర్మాణం యొక్క ప్రధాన అంశాలు ఏమిటి?
సహజ ప్లాస్మిడ్‌లు తరచుగా లోపాలను కలిగి ఉంటాయి, కాబట్టి అవి జన్యు ఇంజనీరింగ్ కోసం క్యారియర్‌లుగా ఉపయోగించడానికి తగినవి కావు మరియు తప్పనిసరిగా సవరించబడాలి మరియు నిర్మించబడాలి: a.సాధారణంగా యాంటీబయాటిక్ జన్యువులు ఎంపిక కోసం ఉపయోగించడానికి సులభమైన రెండు లేదా అంతకంటే ఎక్కువ వంటి తగిన ఎంపిక మార్కర్ జన్యువులను జోడించండి.బి.రీకాంబినేషన్‌ను సులభతరం చేయడానికి తగిన ఎంజైమ్ కట్టింగ్ సైట్‌లను పెంచండి లేదా తగ్గించండి.సి.పొడవును తగ్గించండి, అనవసరమైన శకలాలు కత్తిరించండి, దిగుమతి సామర్థ్యాన్ని మెరుగుపరచండి మరియు లోడింగ్ సామర్థ్యాన్ని పెంచండి.డి.ప్రతిరూపాన్ని బిగుతు నుండి వదులుగా, తక్కువ కాపీల నుండి మరిన్ని కాపీలకు మార్చండి.ఇ.జన్యు ఇంజనీరింగ్ యొక్క ప్రత్యేక అవసరాలకు అనుగుణంగా ప్రత్యేక జన్యు మూలకాలను జోడించండి
4. కణజాల-నిర్దిష్ట cDNA యొక్క అవకలన స్క్రీనింగ్ కోసం ఒక పద్ధతికి ఉదాహరణ ఇవ్వండి?
రెండు కణ జనాభా తయారు చేయబడింది, లక్ష్య జన్యువు ఒక కణాలలో వ్యక్తీకరించబడుతుంది లేదా ఎక్కువగా వ్యక్తీకరించబడుతుంది మరియు లక్ష్య జన్యువు ఇతర కణంలో వ్యక్తీకరించబడదు లేదా తక్కువగా వ్యక్తీకరించబడదు, ఆపై లక్ష్య జన్యువు హైబ్రిడైజేషన్ మరియు పోలిక ద్వారా కనుగొనబడుతుంది.ఉదాహరణకు, కణితులు సంభవించినప్పుడు మరియు అభివృద్ధి చెందుతున్నప్పుడు, కణితి కణాలు సాధారణ కణాల కంటే భిన్నమైన వ్యక్తీకరణ స్థాయిలతో mRNAలను ప్రదర్శిస్తాయి.అందువల్ల, కణితి సంబంధిత జన్యువులను అవకలన హైబ్రిడైజేషన్ ద్వారా పరీక్షించవచ్చు.వ్యక్తీకరణను ప్రేరేపించిన జన్యువులను పరీక్షించడానికి కూడా ఇండక్షన్ పద్ధతిని ఉపయోగించవచ్చు.
5. హైబ్రిడోమా సెల్ లైన్ల ఉత్పత్తి మరియు స్క్రీనింగ్?
ప్లీహము B కణాలు + మైలోమా కణాలు, కణ సంలీనాన్ని ప్రోత్సహించడానికి పాలిథిలిన్ గ్లైకాల్ (PEG)ని జోడించి, HAT మాధ్యమంలో (హైపోక్సాంథైన్, అమినోప్టెరిన్, T కలిగి) పెరిగిన స్ప్లెనిక్ B-మైలోమా ఫ్యూజన్ కణాలు పోషణను విస్తరిస్తూనే ఉంటాయి.సెల్ ఫ్యూజన్ కలిగి ఉంటుంది: ప్లీహము-ప్లీహము కలయిక కణాలు: పెరగడం సాధ్యం కాదు, ప్లీహకణాలు విట్రోలో కల్చర్ చేయబడవు.బోన్-బోన్ ఫ్యూజన్ కణాలు: హైపోక్సాంథైన్‌ను ఉపయోగించలేవు, కానీ ఫోలేట్ రిడక్టేజ్ ఉపయోగించి రెండవ మార్గం ద్వారా ప్యూరిన్‌ను సంశ్లేషణ చేయవచ్చు.అమినోప్టెరిన్ ఫోలేట్ రిడక్టేజ్‌ను నిరోధిస్తుంది మరియు తద్వారా పెరగదు.ఎముక-ప్లీహ సంలీన కణాలు: HATలో పెరుగుతాయి, ప్లీహ కణాలు హైపోక్సాంథైన్‌ను ఉపయోగించగలవు మరియు ఎముక కణాలు కణ విభజన పనితీరును అందిస్తాయి.
6. డియోక్సీ టెర్మినల్ టెర్మినల్ మెథడ్ (సాంగర్ పద్ధతి) ద్వారా DNA యొక్క ప్రాథమిక నిర్మాణాన్ని నిర్ణయించే సూత్రం మరియు పద్ధతి ఏమిటి?
DNA యొక్క పొడిగింపును ముగించడానికి న్యూక్లియోటైడ్ చైన్ టెర్మినేటర్-2,,3,-డైడోక్సిన్యూక్లియోటైడ్‌ను ఉపయోగించడం సూత్రం.3/5/ఫాస్ఫోడీస్టర్ బంధాల ఏర్పాటుకు అవసరమైన 3-OH లోపించినందున, DNA గొలుసులో చేర్చబడిన తర్వాత, DNA గొలుసును మరింత విస్తరించడం సాధ్యం కాదు.బేస్ జత చేసే సూత్రం ప్రకారం, DNA పాలిమరేస్‌కు సాధారణంగా పొడిగించబడిన DNA గొలుసులో పాల్గొనడానికి dNMP అవసరమైనప్పుడు, రెండు అవకాశాలు ఉన్నాయి, ఒకటి ddNTPలో పాల్గొనడం, దీని ఫలితంగా డియోక్సిన్యూక్లియోటైడ్ చైన్ పొడిగింపు రద్దు అవుతుంది;మరొకటి dNTPలో పాల్గొనడం, తద్వారా DNA గొలుసు తదుపరి ddNTP విలీనం అయ్యే వరకు విస్తరించడం కొనసాగించవచ్చు.ఈ పద్ధతి ప్రకారం, ddNTPతో ముగిసే వివిధ పొడవుల DNA శకలాలు సమూహాన్ని పొందవచ్చు.ddAMP, ddGMP, ddCMP మరియు ddTMP అని వరుసగా నాలుగు గ్రూపులుగా విభజించడం పద్ధతి.ప్రతిచర్య తర్వాత, పాలియాక్రిలమైడ్ జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ స్విమ్మింగ్ బ్యాండ్‌ల ప్రకారం DNA క్రమాన్ని చదవగలదు.
7. ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్‌పై యాక్టివేటర్ ప్రోటీన్ (CAP) యొక్క సానుకూల నియంత్రణ ప్రభావం ఏమిటి?
సైక్లిక్ అడెనిలేట్ (cAMP) గ్రాహక ప్రోటీన్ CRP (cAMP రిసెప్టర్ ప్రోటీన్), cAMP మరియు CRP కలయికతో ఏర్పడిన కాంప్లెక్స్‌ను CAP (cAMPactivated ప్రోటీన్) అంటారు.E. coli గ్లూకోజ్ లేని మాధ్యమంలో పెరిగినప్పుడు, CAP యొక్క సంశ్లేషణ పెరుగుతుంది మరియు లాక్టోస్ (లాక్) వంటి ప్రమోటర్లను ఉత్తేజపరిచే పనిని CAP కలిగి ఉంటుంది.కొంతమంది CRP-ఆధారిత ప్రమోటర్లు సాధారణ ప్రమోటర్లు కలిగి ఉండే సాధారణ -35 రీజియన్ సీక్వెన్స్ ఫీచర్ (TTGACA)ని కలిగి ఉండరు.అందువల్ల, ఆర్‌ఎన్‌ఏ పాలిమరేస్‌తో బంధించడం కష్టం.CAP (ఫంక్షన్) ఉనికి: ఎంజైమ్ మరియు ప్రమోటర్ యొక్క బైండింగ్ స్థిరాంకాన్ని గణనీయంగా మెరుగుపరుస్తుంది.ఇది ప్రధానంగా క్రింది రెండు అంశాలను చూపుతుంది: ① CAP ప్రమోటర్ యొక్క ఆకృతిని మరియు ఎంజైమ్‌తో పరస్పర చర్యను మార్చడం ద్వారా ఎంజైమ్ అణువును సరిగ్గా ఓరియంట్ చేయడానికి సహాయపడుతుంది, తద్వారా -10 ప్రాంతంతో కలపడం మరియు -35 ప్రాంతం యొక్క పనితీరును భర్తీ చేసే పాత్రను పోషిస్తుంది.②CAP DNAలోని ఇతర సైట్‌లకు RNA పాలిమరేస్‌ను బంధించడాన్ని కూడా నిరోధించగలదు, తద్వారా దాని నిర్దిష్ట ప్రమోటర్‌కు బైండింగ్ సంభావ్యతను పెంచుతుంది.
8. సాధారణ DNA రీకాంబినేషన్ ప్రయోగంలో సాధారణంగా ఏ దశలు చేర్చబడతాయి?
a.దాత జీవి యొక్క లక్ష్య జన్యువు (లేదా ఎక్సోజనస్ జన్యువు) సంగ్రహించండి మరియు కొత్త రీకాంబినెంట్ DNA అణువును రూపొందించడానికి మరొక DNA అణువుకు (క్లోనింగ్ వెక్టర్) ఎంజైమ్‌గా కనెక్ట్ చేయండి.బి.రీకాంబినెంట్ DNA అణువును గ్రహీత సెల్‌లోకి బదిలీ చేయండి మరియు దానిని గ్రహీత సెల్‌లో ప్రతిరూపం చేసి భద్రపరచండి.ఈ ప్రక్రియను పరివర్తన అంటారు.సి.రీకాంబినెంట్ DNAను గ్రహించిన గ్రహీత కణాలను పరీక్షించి, గుర్తించండి.డి.విదేశీ సహాయ జన్యువు వ్యక్తీకరించబడిందో లేదో గుర్తించడానికి రీకాంబినెంట్ DNA ఉన్న కణాలను మాస్ కల్చర్ చేస్తుంది.
9. జీన్ లైబ్రరీ నిర్మాణం రీకాంబినెంట్ల స్క్రీనింగ్ కోసం మూడు పద్ధతులు ఇవ్వబడ్డాయి మరియు ప్రక్రియ క్లుప్తంగా వివరించబడింది.
యాంటీబయాటిక్ రెసిస్టెన్స్ స్క్రీనింగ్, ఇన్సర్షనల్ ఇన్యాక్టివేషన్ ఆఫ్ రెసిస్టెన్స్, బ్లూ-వైట్ స్పాట్ స్క్రీనింగ్ లేదా PCR స్క్రీనింగ్, డిఫరెన్షియల్ స్క్రీనింగ్, DNA ప్రోబ్ చాలా క్లోనింగ్ వెక్టర్స్ యాంటీబయాటిక్ రెసిస్టెన్స్ జన్యువులను (యాంటీ-యాంపిసిలిన్, టెట్రాసైక్లిన్) కలిగి ఉంటాయి.ప్లాస్మిడ్‌ను ఎస్చెరిచియా కోలిలోకి బదిలీ చేసినప్పుడు, బ్యాక్టీరియా నిరోధకతను పొందుతుంది మరియు బదిలీ లేని వాటికి నిరోధకత ఉండదు.కానీ అది పునర్వ్యవస్థీకరించబడిందా లేదా అనేది వేరు చేయలేము.రెండు రెసిస్టెన్స్ జన్యువులను కలిగి ఉన్న వెక్టర్‌లో, ఒక జన్యువులో ఒక విదేశీ DNA భాగాన్ని చొప్పించి, జన్యువు నిష్క్రియం చేయబడితే, సానుకూల రీకాంబినెంట్‌ల కోసం పరీక్షించడానికి వేర్వేరు మందులను కలిగి ఉన్న రెండు ప్లేట్ నియంత్రణలను ఉపయోగించవచ్చు.ఉదాహరణకు, pUC ప్లాస్మిడ్‌లో LacZ జన్యువు (ఎన్‌కోడింగ్ β-గెలాక్టోసిడేస్) ఉంటుంది, ఇది క్రోమోజెనిక్ సబ్‌స్ట్రేట్ X-gal (5-బ్రోమో-4-క్లోరో-3-ఇండోల్-β-D-గెలాక్టోసైడ్)ను విచ్ఛిన్నం చేసి నీలం రంగులోకి మారుతుంది, తద్వారా జాతి నీలం రంగులోకి మారుతుంది.విదేశీ DNA చొప్పించినప్పుడు, LacZ జన్యువు వ్యక్తీకరించబడదు మరియు జాతి తెల్లగా ఉంటుంది, తద్వారా రీకాంబినెంట్ బ్యాక్టీరియాను పరీక్షించవచ్చు.
10. పిండ మూలకణాల ద్వారా జన్యుమార్పిడి జంతువులను పొందే ప్రాథమిక ప్రక్రియను వివరించండి?
ఎంబ్రియోనిక్ స్టెమ్ సెల్స్ (ES) అనేది పిండం అభివృద్ధి సమయంలో పిండ కణాలు, వీటిని కృత్రిమంగా కల్చర్ చేయవచ్చు మరియు విస్తరించవచ్చు మరియు ఇతర రకాల కణాలుగా విభజించే పనిని కలిగి ఉంటాయి.ES కణాల సంస్కృతి: బ్లాస్టోసిస్ట్ యొక్క అంతర్గత కణ ద్రవ్యరాశి వేరుచేయబడి మరియు కల్చర్ చేయబడింది.ES ఫీడర్-రహిత పొరలో కల్చర్ చేయబడినప్పుడు, అది కండరాల కణాలు మరియు N కణాలు వంటి వివిధ ఫంక్షనల్ సెల్‌లుగా విభేదిస్తుంది.ఫైబ్రోబ్లాస్ట్‌లను కలిగి ఉన్న మాధ్యమంలో కల్చర్ చేసినప్పుడు, ES భేదాత్మక పనితీరును నిర్వహిస్తుంది.ES జన్యుపరంగా తారుమారు చేయబడుతుంది మరియు దాని భేదం ఫంక్షన్‌ను దాని భేదాత్మక పనితీరును ప్రభావితం చేయకుండా ఏకీకృతం చేయవచ్చు, ఇది యాదృచ్ఛిక ఏకీకరణ సమస్యను పరిష్కరిస్తుంది.ఎక్సోజనస్ జన్యువులను పిండ మూలకణాలలోకి ప్రవేశపెట్టండి, ఆపై గర్భిణీ స్త్రీ ఎలుకల గర్భాశయంలోకి అమర్చండి, పిల్లలుగా అభివృద్ధి చెందుతాయి మరియు హోమోజైగస్ ఎలుకలను పొందేందుకు దాటుతుంది.