సెల్ డైరెక్ట్ RT qPCR కిట్-SYBR గ్రీన్ I డైరెక్ట్ సెల్ లైసిస్ సెల్ రెడీ వన్-స్టెప్ qRT-PCR కిట్‌లు
వివరణలు
ఈ కిట్ ఒక ప్రత్యేకమైన లైసిస్ బఫర్ సిస్టమ్‌ను ఉపయోగిస్తుంది, ఇది RT-qPCR ప్రతిచర్యల కోసం కల్చర్డ్ సెల్ నమూనాల నుండి RNAను త్వరగా విడుదల చేయగలదు, తద్వారా సమయం తీసుకునే మరియు శ్రమతో కూడిన RNA శుద్ధి ప్రక్రియను తొలగిస్తుంది.RNA టెంప్లేట్ కేవలం 7 నిమిషాల్లో పొందవచ్చు.ది 5×డైరెక్ట్ RT మిక్స్ మరియు 2×కిట్ అందించిన డైరెక్ట్ qPCR మిక్స్-SYBR రియాజెంట్‌లు నిజ-సమయ పరిమాణాత్మక PCR ఫలితాలను త్వరగా మరియు సమర్థవంతంగా పొందవచ్చు.
5×డైరెక్ట్ RT మిక్స్ మరియు 2×డైరెక్ట్ qPCR మిక్స్-SYBR బలమైన ఇన్హిబిటర్ టాలరెన్స్‌ను కలిగి ఉంటుంది మరియు నమూనాల లైసేట్‌ను నేరుగా RT-qPCR కోసం టెంప్లేట్‌గా ఉపయోగించవచ్చు.ఈ కిట్‌లో ప్రత్యేకమైన RNA హై-అఫినిటీ ఫోర్జీన్ రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్ మరియు హాట్ D-Taq DNA పాలిమరేస్, dNTPs, MgCl ఉన్నాయి.2, రియాక్షన్ బఫర్, PCR ఆప్టిమైజర్ మరియు స్టెబిలైజర్.
స్పెసిఫికేషన్లు
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
కిట్ భాగాలు
| పార్ట్ I | బఫర్ CL |
| ఫోర్జీన్ ప్రోటీజ్ ప్లస్ II | |
| బఫర్ ST | |
| పార్ట్ II | DNA ఎరేజర్ |
| 5× డైరెక్ట్ RT మిక్స్ | |
| 2× డైరెక్ట్ qPCR మిక్స్-SYBR | |
| 50× ROX రిఫరెన్స్ డై | |
| RNase-ఉచిత ddH2O | |
| సూచనలు | |
ఫీచర్లు & ప్రయోజనాలు
■సాధారణ మరియు ప్రభావవంతమైనది : సెల్ డైరెక్ట్ RT సాంకేతికతతో, RNA నమూనాలను కేవలం 7 నిమిషాల్లో పొందవచ్చు.
■ నమూనా డిమాండ్ తక్కువగా ఉంది, 10 సెల్‌లను పరీక్షించవచ్చు.
■ అధిక నిర్గమాంశం: ఇది 384, 96, 24, 12, 6-బావి పలకలలో కల్చర్ చేయబడిన కణాలలో RNAను త్వరగా గుర్తించగలదు.
■ DNA ఎరేజర్ విడుదలైన జన్యువులను త్వరగా తొలగించగలదు, తదుపరి ప్రయోగాత్మక ఫలితాలపై ప్రభావాన్ని బాగా తగ్గిస్తుంది.
■ ఆప్టిమైజ్ చేసిన RT మరియు qPCR సిస్టమ్ రెండు-దశల RT-PCR రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్‌ను మరింత సమర్థవంతంగా మరియు PCRని మరింత నిర్దిష్టంగా చేస్తుంది మరియు RT-qPCR రియాక్షన్ ఇన్హిబిటర్లకు మరింత నిరోధకతను కలిగిస్తుంది.
కిట్ అప్లికేషన్
అప్లికేషన్ యొక్క పరిధి: కల్చర్డ్ సెల్స్.
- నమూనా లైసిస్ ద్వారా విడుదల చేయబడిన RNA: ఈ కిట్ యొక్క RT-qPCR టెంప్లేట్‌కు మాత్రమే వర్తిస్తుంది.
- కిట్‌ని కింది ప్రయోజనాల కోసం ఉపయోగించవచ్చు: జన్యు వ్యక్తీకరణ విశ్లేషణ, siRNA-మధ్యవర్తిత్వ జీన్ సైలెన్సింగ్ ఎఫెక్ట్ యొక్క ధృవీకరణ, డ్రగ్ స్క్రీనింగ్ మొదలైనవి.
రేఖాచిత్రం
నిల్వ మరియు షెల్ఫ్ జీవితం
ఈ కిట్ యొక్క భాగం I 4℃ వద్ద నిల్వ చేయాలి;పార్ట్ II -20℃ వద్ద నిల్వ చేయాలి.
ఫోర్జీన్ ప్రోటీజ్ ప్లస్ II 4 వద్ద నిల్వ చేయాలి℃, -20℃ వద్ద స్తంభింపజేయవద్దు.
కారకం 2×డైరెక్ట్ qPCR మిక్స్-SYBR -20 వద్ద నిల్వ చేయాలి℃చీకటిలో;తరచుగా ఉపయోగిస్తే, అది 4 వద్ద కూడా నిల్వ చేయబడుతుందిస్వల్పకాలిక నిల్వ కోసం ℃ (10 రోజులలోపు ఉపయోగించండి).
రియల్ టైమ్ PCR ప్రైమర్ డిజైన్ సూత్రాలు
ఫార్వర్డ్ ప్రైమర్ మరియు రివర్స్ ప్రైమర్
రియల్ టైమ్ PCR కోసం, ప్రైమర్ డిజైన్ చాలా ముఖ్యం.ప్రైమర్లు PCR యాంప్లిఫికేషన్ యొక్క విశిష్టత మరియు సామర్థ్యానికి సంబంధించినవి మరియు క్రింది సూత్రాలకు సంబంధించి రూపొందించబడతాయి:
ప్రైమర్ పొడవు: 18-30bp.
GC కంటెంట్: 40-60%.
Tm విలువ: ప్రైమర్ 5 వంటి ప్రైమర్ డిజైన్ సాఫ్ట్‌వేర్, ప్రైమర్ యొక్క Tm విలువను ఇవ్వగలదు.అప్‌స్ట్రీమ్ మరియు డౌన్‌స్ట్రీమ్ ప్రైమర్‌ల Tm విలువలు వీలైనంత దగ్గరగా ఉండాలి.Tm గణన సూత్రాన్ని కూడా ఉపయోగించవచ్చు: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR చేస్తున్నప్పుడు, ప్రైమర్ Tm విలువ 5 °C కంటే తక్కువ ఉష్ణోగ్రత సాధారణంగా ఎనియలింగ్ ఉష్ణోగ్రతగా ఎంపిక చేయబడుతుంది (ఎనియలింగ్ ఉష్ణోగ్రతలో సంబంధిత పెరుగుదల PCR ప్రతిచర్య యొక్క నిర్దిష్టతను పెంచుతుంది).
ప్రైమర్లు మరియు PCR ఉత్పత్తులు:
డిజైన్ ప్రైమర్ PCR యాంప్లిఫికేషన్ ఉత్పత్తి పొడవు ప్రాధాన్యంగా 100-150bp.
టెంప్లేట్ యొక్క సెకండరీ స్ట్రక్చరల్ ఏరియాలో డిజైన్ ప్రైమర్‌లను వీలైనంత వరకు నివారించాలి.
అప్‌స్ట్రీమ్ మరియు డౌన్‌స్ట్రీమ్ ప్రైమర్‌ల 3′ చివరల మధ్య 2 లేదా అంతకంటే ఎక్కువ కాంప్లిమెంటరీ బేస్‌ల ఏర్పాటును నివారించండి.
ప్రైమర్ 3′ టెర్మినల్ బేస్ 3 అదనపు వరుస G లేదా Cతో ఉండకూడదు.
ప్రైమర్లు తాము పరిపూరకరమైన నిర్మాణాలను కలిగి ఉండవు, లేకుంటే ఒక హెయిర్‌పిన్ నిర్మాణం ఏర్పడుతుంది, ఇది PCR విస్తరణను ప్రభావితం చేస్తుంది.
ATCGని ప్రైమర్ సీక్వెన్స్‌లో వీలైనంత సమానంగా పంపిణీ చేయాలి మరియు 3′ టెర్మినల్ బేస్‌ను T వలె నివారించాలి.
అనుబంధం 1: సెల్ డైరెక్ట్ RT-qPCR కిట్ కాంపోనెంట్ సప్లిమెంట్ ప్యాక్
1.సెల్ లిసిస్ సొల్యూషన్
|
| |||
| కిట్ భాగాలు (24-బావి లైసిస్ సిస్టమ్ / బావి) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 టి | 500 టి | ||
| భాగంI | బఫర్ CL | 20 మి.లీ | 100 మి.లీ |
| ఫోర్జీన్ ప్రోటీజ్ ప్లస్ II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| బఫర్ ST | 1 ml × 2 | 10 మి.లీ | |
| భాగంII | DNA ఎరేజర్ | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT మిక్స్
|
| |
| కిట్ భాగాలు (20 μl ప్రతిచర్య వ్యవస్థ) | DRT-01011-B1 |
| 200 టి | |
| 5× డైరెక్ట్ RT మిక్స్ | 800 μl |
| RNase-ఉచిత ddH2O | 1.7 ml × 2 |
|
| ||
| కిట్ భాగాలు (20 μl ప్రతిచర్య వ్యవస్థ) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 టి | 1000 టి | |
| 2× డైరెక్ట్ qPCR మిక్స్-SYBR | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 50× ROX రిఫరెన్స్ డై | 40 μl | 200 μl |
| RNase-ఉచిత ddH2O | 1.7 మి.లీ | 10 మి.లీ |
ఇన్‌స్ట్రక్షన్ మాన్యువల్‌లు:
