కాలమ్ ప్లగ్ చేయబడింది

కాలమ్ ప్లగ్ చేయబడిన తర్వాత, RNA దిగుబడి తగ్గిపోతుంది లేదా RNAను శుద్ధి చేయడం అసాధ్యం, మరియు పొందిన RNA ద్రవ్యరాశి తక్కువగా ఉంటుంది.

సాధారణ కారణాల విశ్లేషణ:

1. నమూనా విరామాలు క్షుణ్ణంగా లేవు.

నమూనా విచ్ఛిన్నం DNA-క్లీనింగ్ కాలమ్ పూర్తిగా నిరోధించబడదు, అయితే RNA దిగుబడి మరియు నాణ్యతను ప్రభావితం చేస్తుంది.మీరు నమూనాలను విచ్ఛిన్నం చేసినప్పుడు, నమూనా సెల్ గోడ, కణ త్వచం మరియు ఇతర కణజాలాలను అణిచివేసేందుకు ప్రయత్నించండి, తగినంత ద్రవ నైట్రోజన్‌లో వేగంగా గ్రౌండింగ్ చేయమని మేము సిఫార్సు చేస్తున్నాము.పాలియోల్ పాలీశాకరైడ్‌ల మొక్కల నమూనాల కోసం, మీరు ప్లాంట్ టోటల్ RNA ఐసోలేషన్ కిట్ ప్లస్‌ని ఉపయోగించాలని మేము సిఫార్సు చేస్తున్నాము.

2. DNA-క్లీనింగ్ కాలమ్‌తో వేరు చేయబడిన నమూనా సూపర్‌నాటెంట్‌ను పీల్చినప్పుడు, సాధ్యమయ్యే సెల్ ఫ్రాగ్మెంటెడ్ అవక్షేపం పీల్చబడవచ్చు.

తీసుకున్న సెల్ ఫ్రాగ్మెంటెడ్ అవక్షేపాలు RNA-మాత్రమే కాలమ్‌కు కారణమవుతాయి, ఇది RNA శోషణ ఆపరేషన్ చేసినప్పుడు బ్లాక్ చేయబడుతుంది (దశ 6 చూడండి).సెల్ శిధిలాలు పీల్చుకోకుండా ఉండటానికి ఈ సూపర్‌నాటెంట్‌ను పీల్చేటప్పుడు జాగ్రత్తగా ఉండాలని మేము మీకు సిఫార్సు చేస్తున్నాము.

3. నమూనా ప్రారంభ మొత్తం చాలా ఎక్కువ.

అధిక నమూనా వినియోగం బఫర్ PSL1 ద్వారా అసంపూర్ణ నమూనా ఫ్రాగ్మెంటేషన్ లేదా అసంపూర్ణ సెల్ లైసిస్‌కు దారి తీస్తుంది, దీని ఫలితంగా శుద్దీకరణ సమయంలో శుద్దీకరణ నిలువు వరుస నిరోధించబడుతుంది.మొక్క మొత్తం RNA ఐసోలేషన్ కిట్ ప్రతి ఒక్క శుద్ధి చేయబడిన ఆపరేటింగ్ నమూనా 50 mg.పాలియోల్ పాలీశాకరైడ్‌ల మొక్కల నమూనాల కోసం, మీరు ప్లాంట్ టోటల్ RNA ఐసోలేషన్ కిట్ ప్లస్‌ని ప్రయత్నించాలని మేము సిఫార్సు చేస్తున్నాము.

4. సెంట్రిఫ్యూజ్ యొక్క ఉష్ణోగ్రత చాలా తక్కువగా ఉంది.

మొత్తం RNA ఐసోలేషన్ మరియు శుద్దీకరణ ప్రక్రియ గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద నిర్వహించబడుతుంది (20-25°సి), ద్రవ నత్రజని ద్వారా నమూనా కణజాలం విరిగిపోతుంది. కొన్ని క్రయోజెనిక్ సెంట్రిఫ్యూజ్‌ల ఉష్ణోగ్రత 20 కంటే తక్కువగా ఉంటుంది℃, ఇది DNA-క్లీనింగ్ కాలమ్ మరియు/లేదా RNA-మాత్రమే కాలమ్‌కు అడ్డుపడవచ్చు.ఇది జరిగితే, సెంట్రిఫ్యూజ్ ఉష్ణోగ్రతను 20-25కి సెట్ చేయండి℃, మరియులైసిస్ మిశ్రమం మరియు/లేదా ఇథనాల్ జోడించిన సూపర్‌నాటెంట్ 37కి వేడి చేయబడిందని నిర్ధారించుకోండి°C.

RNA సంగ్రహించబడలేదు లేదా RNA దిగుబడి తక్కువగా లేదు

సాధారణంగా రికవరీ సామర్థ్యాన్ని ప్రభావితం చేసే అనేక అంశాలు ఉన్నాయి, అవి: నమూనా RNA కంటెంట్, ఆపరేషన్ పద్ధతి, ఎలుషన్ వాల్యూమ్, మొదలైనవి.

క్రింది సాధారణ కారణాల విశ్లేషణ:

1.ఆపరేషన్ సమయంలో మంచు స్నానం లేదా తక్కువ ఉష్ణోగ్రత (4°C) సెంట్రిఫ్యూగేషన్ జరిగింది.

సూచన: గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద పనిచేయండి (15-25°సి) మొత్తం ప్రక్రియలో, మంచు స్నానం మరియు తక్కువ ఉష్ణోగ్రత సెంట్రిఫ్యూగేషన్ చేయవద్దు.

2.నమూన యొక్క సరికాని సంరక్షణ లేదా నమూనా యొక్క దీర్ఘ-కాల సంరక్షణ కారణంగా RNA క్షీణించింది.

సిఫార్సు: తాజాగా సేకరించిన నమూనాలను ద్రవ నత్రజనిలో శీఘ్రంగా స్తంభింపజేయాలి, ఆపై -80 ° C వద్ద చాలా కాలం పాటు నిల్వ చేయాలి, నమూనాలను పదేపదే గడ్డకట్టడం మరియు కరిగించడం నివారించాలి;లేదా వెంటనే నమూనాలను RNA స్టెబిలైజర్ RNAlater ద్రావణంలో (జంతువుల నమూనాలు) నానబెట్టండి.

3.తగినంత నమూనా ఫ్రాగ్మెంటేషన్ మరియు లైసిస్ శుద్దీకరణ కాలమ్ యొక్క ప్రతిష్టంభనకు దారి తీస్తుంది.

సూచన: కణజాలాన్ని గ్రౌండింగ్ చేస్తున్నప్పుడు, దయచేసి కణజాలం తగినంతగా గ్రౌండ్ చేయబడిందని నిర్ధారించుకోండి మరియు దానిని ముందుగా సిద్ధం చేసిన బఫర్ PSL1కి త్వరగా బదిలీ చేయండి (β-ME యొక్క సరైన నిష్పత్తి జోడించబడిందని నిర్ధారించండి, విధానం యొక్క దశ 1 చూడండి).

4.ఎలుయెంట్ తప్పుగా జోడించబడింది.

సూచన: RNase-Free ddH2O ప్యూరిఫికేషన్ కాలమ్ మెమ్బ్రేన్ మధ్యలో డ్రిప్ చేయబడిందని నిర్ధారించుకోండి.

5.బఫర్ PSL2 లేదా బఫర్ PRW2కి సంపూర్ణ ఇథనాల్ యొక్క సరైన వాల్యూమ్ జోడించబడలేదు.

సూచన: దయచేసి సూచనలను అనుసరించండి, బఫర్ PSL2 మరియు బఫర్ PRW2కి సంపూర్ణ ఇథనాల్ యొక్క సరైన వాల్యూమ్‌ను జోడించి, కిట్‌ను ఉపయోగించే ముందు బాగా కలపండి.

6. కణజాల నమూనా మొత్తం సరికాదు.

సూచన: బఫర్ PSL1 యొక్క 500 μlకి 50 mg కణజాలాన్ని ఉపయోగించండి.చాలా కణజాలాన్ని ఉపయోగించడం వలన సంగ్రహించబడిన RNA మొత్తం తగ్గిపోతుంది మరియు ఫలితంగా RNA యొక్క స్వచ్ఛత కూడా తగ్గుతుంది.RNA వెలికితీత ఆపరేషన్‌కు ప్రారంభ నమూనా మోతాదు 50 mg కంటే ఎక్కువ ఉండకూడదని మేము గట్టిగా సిఫార్సు చేస్తున్నాము.

7.అనుచితమైన ఎలుషన్ వాల్యూమ్ లేదా అసంపూర్ణ ఎలుషన్.

సూచన: శుద్దీకరణ కాలమ్ యొక్క ఎలుయెంట్ వాల్యూమ్ 50-200 μl;ఎలుషన్ ప్రభావం సంతృప్తికరంగా లేకుంటే, ముందుగా వేడిచేసిన RNase-Free ddH2Oని జోడించిన తర్వాత గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద సమయాన్ని పొడిగించాలని సిఫార్సు చేయబడింది, ఉదాహరణకు 5-10నిమి.

8.బఫర్‌పిఆర్‌డబ్ల్యు2తో కడిగిన తర్వాత శుద్దీకరణ కాలమ్‌లో ఇథనాల్ అవశేషాలు ఉంటాయి.

సూచన: ఖాళీ ట్యూబ్‌ను 1 నిమి సెంట్రిఫ్యూజ్ చేసి, బఫర్ PRW2లో కడిగిన తర్వాత ఇంకా ఇథనాల్ మిగిలి ఉంటే, మీరు ఖాళీ ట్యూబ్ సెంట్రిఫ్యూగేషన్ సమయాన్ని 2 నిమిషాలకు పెంచవచ్చు లేదా అవశేష ఇథనాల్‌ను పూర్తిగా తొలగించడానికి గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 5 నిమిషాల పాటు ప్యూరిఫికేషన్ కాలమ్‌ను ఉంచవచ్చు.

9.కిట్ తప్పుగా ఉపయోగించబడింది.

సూచన: పాలీఫెనోలిక్ పాలీశాకరైడ్‌ల మొక్కల నమూనాల కోసం, ప్లాంట్ టోటల్ RNA ఐసోలేషన్ కిట్ వంటి సాధారణ కిట్‌లను ఉపయోగించడం వల్ల ఆదర్శ RNA నమూనాలను పొందలేకపోవచ్చు.ప్లాంట్ టోటల్ ఆర్‌ఎన్‌ఏ ఐసోలేషన్‌కిట్ ప్లస్‌ను ఉపయోగించమని మేము మీకు సిఫార్సు చేస్తున్నాము, ఇది ప్రత్యేకంగా పాలీఫెనోలిక్ పాలీశాకరైడ్ ప్లాంట్ నమూనాల కోసం రూపొందించబడింది.పాలీఫెనాల్ మరియు పాలీశాకరైడ్ ప్లాంట్ శాంపిల్స్ నుండి ఆర్‌ఎన్‌ఏను సేకరించేందుకు ప్రత్యేకంగా రూపొందించిన కిట్.

OD260/OD280 విలువ తక్కువగా ఉంది

ddH2Oతో RNA ఎల్యూషన్ మరియు స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్ రీడింగ్‌ల కోసం ఉపయోగించబడుతుంది, ఫలితంగా తక్కువ OD260/OD280 విలువలు ఉంటాయి.సాపేక్షంగా సరైన OD260/OD280 విలువలను పొందేందుకు 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (RNAని ఎలిట్ చేయడానికి RNase-Free ddH2O కాకుండా) ఉపయోగించమని మేము సిఫార్సు చేస్తున్నాము, పేజీ 19లో “RNA ఏకాగ్రత మరియు శుద్ధీకరణ పరీక్షలు” చూడండి.

శుద్ధి చేయబడిన RNA అధోకరణం చెందుతుంది

శుద్ధి చేయబడిన RNA యొక్క నాణ్యత నమూనా సంరక్షణ, RNase కాలుష్యం మరియు తారుమారు వంటి అంశాలకు సంబంధించినది.

సాధారణ కారణాల విశ్లేషణ:

1. కణజాల నమూనాలు సేకరించిన తర్వాత సమయానికి నిల్వ చేయబడవు.

సిఫార్సు: సేకరించిన తర్వాత కణజాల నమూనాలను సకాలంలో ఉపయోగించకపోతే, దయచేసి వాటిని తక్కువ ఉష్ణోగ్రత వద్ద ద్రవ నైట్రోజన్‌లో వెంటనే నిల్వ చేయండి లేదా ద్రవ నత్రజనిలో త్వరగా గడ్డకట్టిన తర్వాత దీర్ఘకాలిక నిల్వ కోసం వాటిని -80 ° Cకి బదిలీ చేయండి లేదా నమూనాలను వెంటనే RNA స్టెబిలైజర్ RNA లేటర్ ద్రావణంలో (జంతువుల నమూనాలు) ముంచండి.RNA వెలికితీత కోసం, తాజాగా సేకరించిన కణజాల నమూనాలను ఉపయోగించడానికి ప్రయత్నించండి.

2.టిష్యూ శాంపిల్స్‌ని పదేపదే గడ్డకట్టడం మరియు కరిగించడం.

సూచన: కణజాల నమూనాలను నిల్వ చేసేటప్పుడు, వాటిని నిల్వ చేయడానికి వాటిని చిన్న ముక్కలుగా కట్ చేయడం ఉత్తమం మరియు నమూనాలను పదేపదే గడ్డకట్టడం మరియు కరిగించడం వల్ల కలిగే RNA క్షీణతను నివారించడానికి వాటిని ఉపయోగించినప్పుడు వాటిలో కొంత భాగాన్ని తీయండి.

3.RNase ఆపరేషన్ గదిలో ప్రవేశపెట్టబడింది లేదా పునర్వినియోగపరచలేని చేతి తొడుగులు, ముసుగులు మొదలైన వాటిని ధరించదు.

సూచన: RNA వెలికితీత ప్రయోగాలు ప్రత్యేక RNA ఆపరేషన్‌లలో ఉత్తమంగా నిర్వహించబడతాయి మరియు ప్రయోగశాల పట్టికను ప్రయోగానికి ముందు శుభ్రం చేయాలి మరియు RNaseని ప్రవేశపెట్టడం వల్ల కలిగే RNA క్షీణతను నివారించడానికి ప్రయోగం సమయంలో డిస్పోజబుల్ గ్లోవ్స్ మరియు మాస్క్‌లను ధరించాలి.

4. రియాజెంట్ ఉపయోగం సమయంలో RNase ద్వారా కలుషితమవుతుంది.

సూచన: సంబంధిత ప్రయోగాల కోసం కొత్త శ్రేణి మొక్కల మొత్తం RNA వెలికితీత కిట్‌లతో భర్తీ చేయండి.

5. RNA మానిప్యులేషన్ కోసం ఉపయోగించే సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్‌లు మరియు పైపెట్ చిట్కాలు RNaseతో కలుషితమయ్యాయి.

సూచన: RNA వెలికితీతలో ఉపయోగించే సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్‌లు, పైపెట్ చిట్కాలు, పైపెట్‌లు మొదలైనవన్నీ RNase-రహితంగా ఉన్నాయని నిర్ధారించుకోండి.

ఇన్‌స్ట్రక్షన్ మాన్యువల్‌లు:

ప్లాంట్ టోటల్ RNA ఐసోలేషన్ కిట్ ప్లస్ ఇన్‌స్ట్రక్షన్ మాన్యువల్