సమస్యల విశ్లేషణ కోసం మార్గదర్శకాలు

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

RNA తీయబడదు లేదా న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ దిగుబడి తక్కువగా ఉంటుంది

సాధారణంగా రికవరీ సామర్థ్యాన్ని ప్రభావితం చేసే అనేక అంశాలు ఉన్నాయి, అవి: నమూనా RNA కంటెంట్, ఆపరేషన్ పద్ధతి, ఎలుషన్ వాల్యూమ్ మొదలైనవి.

సాధారణ కారణాల విశ్లేషణ:

1.ఐస్ బాత్ లేదా ఆపరేషన్ సమయంలో తక్కువ-ఉష్ణోగ్రత (4 ° C) సెంట్రిఫ్యూగేషన్.

సూచన: గది ఉష్ణోగ్రత (15-25 ° C) ఆపరేషన్, ఎప్పుడూ మంచు స్నానం మరియు తక్కువ ఉష్ణోగ్రత సెంట్రిఫ్యూజ్.

2. చాలా కాలం పాటు సరికాని నమూనా నిల్వ లేదా నమూనా నిల్వ.

సూచన: నమూనాలను -80 ° C వద్ద నిల్వ చేయండి లేదా ద్రవ నత్రజనిలో స్తంభింపజేయండి మరియు పదేపదే ఫ్రీజ్-థా వినియోగాన్ని నివారించండి;RNA వెలికితీత కోసం తాజాగా సేకరించిన నమూనాలను ఉపయోగించడానికి ప్రయత్నించండి.

3.తగినంత నమూనా లైసిస్

సిఫార్సు: దయచేసి శాంపిల్ మరియు వర్కింగ్ సొల్యూషన్ (లీనియర్ యాక్రిలమైడ్) గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద (15-25 ° C) 10 నిమిషాల పాటు పూర్తిగా మిక్స్ చేసి, పొదిగేలా చూసుకోండి.

4.ఎలుయెంట్ తప్పుగా జోడించబడింది

సిఫార్సు: RNase-Free ddH2O శుద్దీకరణ కాలమ్ యొక్క పొర మధ్యలో జోడించబడిందని నిర్ధారించుకోండి

5.బఫర్ viRW2లో అన్‌హైడ్రస్ ఇథనాల్ యొక్క సరికాని వాల్యూమ్

సూచన: దయచేసి సూచనలను అనుసరించండి, బఫర్ విఆర్‌డబ్ల్యు2కి సరైన పరిమాణంలో అన్‌హైడ్రస్ ఇథనాల్‌ను జోడించి, కిట్‌ని ఉపయోగించే ముందు వాటిని బాగా కలపండి.

6. సరికాని నమూనా వినియోగం.

సూచన: బఫర్ viRL యొక్క 500μlకి 200µl నమూనా.అధిక నమూనా వాల్యూమ్ తగ్గిన RNA వెలికితీత రేటుకు దారి తీస్తుంది.

7.ఇంప్రోపర్ ఎలుషన్ వాల్యూమ్ లేదా అసంపూర్ణ ఎలుషన్.

సూచన: శుద్దీకరణ కాలమ్ యొక్క ఎలుయెంట్ వాల్యూమ్ 30-50μl;ఎలుషన్ ప్రభావం సంతృప్తికరంగా లేకుంటే, ముందుగా వేడిచేసిన RNase-Free ddHని జోడించమని సిఫార్సు చేయబడింది₂O మరియు గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద ఉంచే సమయాన్ని పొడిగించండి, ఉదాహరణకు 5-10నిమి

8.బఫర్ viRW2లో ప్రక్షాళన చేసిన తర్వాత ప్యూరిఫికేషన్ కాలమ్‌లో ఇథనాల్ అవశేషాలు ఉంటాయి.

సూచన: బఫర్ viRW2లో ప్రక్షాళన చేసిన తర్వాత మరియు 2నిమిషాల పాటు ఖాళీ-ట్యూబ్ సెంట్రిఫ్యూగేషన్ చేసిన తర్వాత కూడా ఇథనాల్ మిగిలి ఉంటే, మిగిలిన ఇథనాల్‌ను పూర్తిగా తొలగించడానికి ఖాళీ-ట్యూబ్ సెంట్రిఫ్యూగేషన్ తర్వాత 5నిమిషాల పాటు ప్యూరిఫికేషన్ కాలమ్‌ను గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద ఉంచవచ్చు.

శుద్ధి చేయబడిన RNA అణువుల క్షీణత

శుద్ధి చేయబడిన RNA యొక్క నాణ్యత నమూనా నిల్వ, RNase కాలుష్యం మరియు ఆపరేషన్ వంటి అంశాలకు సంబంధించినది.

సాధారణ కారణాల విశ్లేషణ:

1. సేకరించిన నమూనాలు సమయానికి సేవ్ చేయబడలేదు.

సూచన: సేకరించిన తర్వాత నమూనా సకాలంలో ఉపయోగించబడకపోతే, దయచేసి దానిని -80 ℃ లేదా ద్రవ నత్రజని వద్ద వెంటనే నిల్వ చేయండి.RNA అణువుల వెలికితీత కోసం, వీలైనప్పుడల్లా తాజాగా సేకరించిన నమూనాలను ఉపయోగించడానికి ప్రయత్నించండి.

2. సేకరించిన నమూనాలు గడ్డకట్టడం మరియు పదేపదే కరిగిపోవడం.

సూచన: నమూనా సేకరణ మరియు నిల్వ సమయంలో పదేపదే గడ్డకట్టడం మరియు కరిగించడం (ఒకసారి కంటే ఎక్కువ కాదు) నివారించండి, లేకుంటే న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ దిగుబడి తగ్గుతుంది.

3.RNase ఆపరేటింగ్ గదిలో ప్రవేశపెట్టబడింది లేదా పునర్వినియోగపరచలేని చేతి తొడుగులు, ముసుగులు మొదలైనవి ధరించలేదు.

సూచన: RNA అణువుల వెలికితీత ప్రయోగం ప్రత్యేక RNA ఆపరేషన్ గదిలో ఉత్తమంగా నిర్వహించబడుతుంది మరియు ప్రయోగానికి ముందు ప్రయోగాత్మక పట్టిక శుభ్రం చేయబడుతుంది.RNase పరిచయం వల్ల కలిగే RNA క్షీణతను నివారించడానికి ప్రయోగం సమయంలో పునర్వినియోగపరచలేని చేతి తొడుగులు మరియు ముసుగులు ధరించండి.

4. రియాజెంట్ ఉపయోగం సమయంలో RNase ద్వారా కలుషితమవుతుంది.

సూచన: సంబంధిత ప్రయోగాల కోసం కొత్త వైరల్ RNA ఐసోలేషన్ కిట్‌తో భర్తీ చేయండి.

5. సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్‌లు, పైపెట్ చిట్కాలు మొదలైన వాటి యొక్క RNase కాలుష్యం. సూచన: సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్‌లు, పైపెట్ చిట్కాలు మరియు పైపెట్‌లు అన్నీ RNase-రహితంగా ఉన్నాయని నిర్ధారించుకోండి.

శుద్ధి చేయబడిన RNA అణువులు దిగువ ప్రయోగాలను ప్రభావితం చేశాయి

శుద్దీకరణ కాలమ్ ద్వారా శుద్ధి చేయబడిన RNA అణువులు చాలా ఉప్పు అయాన్లు లేదా ప్రోటీన్లు ఉన్నట్లయితే దిగువ ప్రయోగాలను ప్రభావితం చేస్తాయి, అవి: రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్షన్, నార్తర్న్ బ్లాట్ మొదలైనవి.

1.ఎలుటెడ్ RNA అణువులలో మిగిలిన ఉప్పు అయాన్లు ఉన్నాయి.

సిఫార్సు: నిర్జల ఇథనాల్ యొక్క సరైన వాల్యూమ్ బఫర్ viRW2కి జోడించబడిందని నిర్ధారించుకోండి మరియు ఆపరేటింగ్ సూచనలపై సరైన సెంట్రిఫ్యూగేషన్ వేగం ప్రకారం శుద్దీకరణ కాలమ్‌ను రెండుసార్లు కడగాలి; ఇంకా ఉప్పు అయాన్‌లు మిగిలి ఉంటే, మీరు బఫర్ viRW2ని శుద్ధి కాలమ్‌కు జోడించి, గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 5 నిమిషాలు వదిలివేయవచ్చు.అప్పుడు ఉప్పు అయాన్ల కాలుష్యాన్ని అత్యధిక స్థాయిలో తొలగించడానికి సెంట్రిఫ్యూగేషన్ చేయండి

2.ఎలుటెడ్ RNA అణువులలో మిగిలిన ఇథనాల్ ఉన్నాయి

సూచన: బఫర్ viRW2 ద్వారా ప్యూరిఫికేషన్ నిలువు వరుసలు కడిగివేయబడిందని నిర్ధారించిన తర్వాత, ఆపరేటింగ్ సూచనలపై సెంట్రిఫ్యూగల్ వేగం ప్రకారం ఖాళీ-ట్యూబ్ సెంట్రిఫ్యూగేషన్ చేయండి.ఇంకా ఇథనాల్ మిగిలి ఉంటే, మిగిలిన ఇథనాల్‌ను చాలా వరకు తొలగించడానికి ఖాళీ-ట్యూబ్ సెంట్రిఫ్యూగేషన్ తర్వాత గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 5 నిమిషాలు వదిలివేయవచ్చు.

ఇన్‌స్ట్రక్షన్ మాన్యువల్‌లు:

వైరల్ RNA ఐసోలేషన్ కిట్ ఇన్‌స్ట్రక్షన్ మాన్యువల్