RNase అనేది చాలా సున్నితమైన పదం, తరచుగా RNA వెలికితీత ప్రయోగాలు చేసే చాలా మంది విద్యార్థులు వినడానికి ఇష్టపడరు.పూర్తిగా సాయుధమై, చివరకు అత్యంత విషపూరిత కారకాలైన ఫినాల్ మరియు క్లోరోఫామ్‌లతో సేకరించిన RNA క్షీణించింది.నేను రాజీపడలేదు!!!ఈ రోజు, ప్రసిద్ధ Rnase యొక్క మూలాన్ని పరిశీలిద్దాం.

Ribonuclease (RNase), లేదా RNase, RNAను చిన్న అణువులుగా హైడ్రోలైజ్ చేయగల ఒక న్యూక్లీస్.RNase, ఒక చిన్న అణువు ప్రోటీన్ వలె, అసాధారణంగా స్థిరంగా ఉంటుంది .సాంప్రదాయిక అధిక ఉష్ణోగ్రత మరియు అధిక పీడన ఆవిరి స్టెరిలైజేషన్ మరియు ప్రోటీన్ ఇన్హిబిటర్లు దీనిని పూర్తిగా నిష్క్రియం చేయలేవు.RNase యొక్క స్థిరత్వం ప్రధానంగా నిర్మాణంలోని డైసల్ఫైడ్ బంధాల నుండి వస్తుంది.ఉదాహరణకు, బోవిన్ ప్యాంక్రియాస్ యొక్క సాధారణంగా ఉపయోగించే RNase కేవలం 124 అమైనో ఆమ్లాలను కలిగి ఉంటుంది, కానీ 4 డైసల్ఫైడ్ బంధాలను కలిగి ఉంటుంది.సల్ఫర్ బాండ్ మరియు డైసల్ఫైడ్ బాండ్ అద్భుతమైన ఉష్ణ స్థిరత్వంతో RNaseని అందిస్తాయి.అదనంగా, rnase సాపేక్షంగా చిన్న పరమాణు బరువును కలిగి ఉంటుంది మరియు అనేక సందర్భాల్లో దాని అసలు ఆకృతిని త్వరగా పునరుద్ధరించగలదు.

చాలా స్థిరంగా ఉండటంతో పాటు,ప్రయోగశాలలో RNases సర్వవ్యాప్తి చెందుతాయి .RNase ఒక జీవ రక్షణ విధానం.ఒక కణం కోసం, బాహ్య RNA తరచుగా ప్రాణాంతకం.బాహ్య DNA తో పోలిస్తే, బాహ్య RNA తరచుగా మరింత ప్రమాదకరం.RNA సంతోషంగా లిప్యంతరీకరించబడింది మరియు అనువదించబడింది, కాబట్టి దాదాపు అన్ని జీవులు బాహ్య RNA యొక్క దాడికి వ్యతిరేకంగా రక్షించడానికి RNaseలను అభివృద్ధి చేశాయి.అందువల్ల, ప్రయోగశాలలో సాగు చేయబడిన బ్యాక్టీరియా కణాలు మరియు ఆర్‌ఎన్‌ఏను సేకరించే మీరు RNase యొక్క సువాసనను వెదజల్లుతారు.మానవ శరీర ద్రవాలు (లాలాజలం, కన్నీళ్లు మొదలైనవి) పెద్ద మొత్తంలో RNaseని కలిగి ఉంటాయి, కాబట్టి RNA క్షీణించినప్పుడు ఏడవకండి.మీరు ఎంత ఎక్కువ ఏడుస్తుంటే, RNA క్షీణత అంత ఘోరంగా ఉంటుంది!!RNA వెలికితీతకు సోదరి Daiyu తగినది కాదు!

అదనంగా, మీ సున్నితమైన చర్మం చాలా RNaseని కలిగి ఉంటుంది మరియు చర్మం తాకిన గుర్తులు, పైపెట్‌లు, రిఫ్రిజిరేటర్ తలుపులు మరియు డోర్ హ్యాండిల్స్‌లో కూడా RNase ఉంటుంది.

చాలా ర్యాంబ్లింగ్‌తో, RNases‌తో ఎలా వ్యవహరించాలో చూద్దాం.

ఆర్‌ఎన్‌ఏను తొలగించేటప్పుడు ప్రతి ఒక్కరూ ఆలోచించే మొదటి విషయంDEPC(డైథైల్ పైరోకార్బోనేట్).DEPC ప్రధానంగా RNase యాక్టివ్ గ్రూప్ హిస్టిడిన్ యొక్క ఇమిడాజోల్ రింగ్‌తో కలపడం ద్వారా ప్రోటీన్‌ను నిర్వీర్యం చేస్తుంది, తద్వారా ఎంజైమ్ యొక్క కార్యాచరణను నిరోధిస్తుంది.0.1% DEPC Rnaseపై మెరుగైన తొలగింపు ప్రభావాన్ని కలిగి ఉంటుంది, అయితే DEPC అనేది క్యాన్సర్ కారకం అని మనం గమనించాలి, కాబట్టి దానిని ఉపయోగించినప్పుడు ప్రత్యేక శ్రద్ధ ఉండాలి.

RNase కోసం, మనం రెండు అంశాల నుండి ప్రారంభించాలి,మొదటిది ఎండోజెనస్ RNase యొక్క కార్యాచరణను నిరోధించడం

ట్రైజోల్‌లో ఉన్న గ్వానిడైన్ ఐసోథియోసైనేట్ మరియు DTT వంటి సాంప్రదాయిక RNA వెలికితీత కారకాలు RNase యొక్క డైసల్ఫైడ్ బంధాన్ని తెరవగలవు, అయితే ఇప్పటికీ కొన్ని RNaseలు ఉన్నాయి, ముఖ్యంగా కణజాల నమూనాలలో, కాబట్టి తక్కువ ఉష్ణోగ్రతపై శ్రద్ధ వహించండి.

1.కణజాల నమూనాను బయటకు తీసిన వెంటనే ద్రవ నైట్రోజన్‌లో లేదా వాణిజ్య RNA సంరక్షణ ద్రావణంలో ముంచండి.

2.సెల్ నమూనా యొక్క RNAను సంగ్రహించిన తర్వాత, దానిని లైసిస్ ద్రావణంలో జోడించి, ఐస్ బాక్స్‌పై లైస్ చేయండి

3. గ్రౌండింగ్ కోసం ద్రవ నత్రజనిని ఉపయోగించడం ఉత్తమం కణజాల నమూనాలు సజాతీయంగా ఉన్నప్పుడు.లిక్విడ్ నైట్రోజన్ లేకుండా ఎలక్ట్రిక్ హోమోజెనిజర్‌ను ఉపయోగిస్తున్నప్పుడు, హోమోజెనేట్ అడాప్టర్‌ను పూర్తిగా ముందుగా చల్లబరచడానికి శ్రద్ధ వహించండి.

రెండవది ఎక్సోజనస్ DNase

1.పూర్తిగా ఆయుధాలు ధరించండి, ల్యాబ్ కోట్ ధరించండి, మాస్క్ ధరించండి మరియు ఒక జత కొత్త గ్లోవ్‌లను ధరించడం ఖాయం (అంత పొదుపుగా ఉండకండి!! ట్రైజోల్ సూపర్ కారోసివ్ అని గమనించాలి మరియు ఇది గ్లోవ్‌ల ద్వారా కూడా చాలా బలంగా ఉంటుంది, కాబట్టి మీ చేతులకు డ్రిప్ చేయవద్దు).

2.ఉపయోగించిన అన్ని పైపెట్ చిట్కాలు, EP ట్యూబ్‌లు, PCR ట్యూబ్‌లు మరియు ఇతర పరికరాలు తప్పనిసరిగా డి-RNase చికిత్స చేయబడాలి.దీనిని 0.1% DEPCలో నానబెట్టి, ఆపై అధిక పీడనం కింద ఒత్తిడి చేయవచ్చు.ఫ్యూమ్ హుడ్‌లో ఆపరేషన్‌పై శ్రద్ధ వహించండి.స్థానిక నిరంకుశులు ఎంజైమ్‌లను తొలగించడానికి నేరుగా వినియోగ వస్తువులను కొనుగోలు చేయవచ్చు.

PS: నేను మీకు ఒక సోమరి పద్ధతి చెబుతాను.అధిక ఉష్ణోగ్రత మరియు అధిక పీడనం RNaseని పూర్తిగా తొలగించలేనప్పటికీ, అది దానిలో ఎక్కువ భాగాన్ని తొలగిస్తుంది.2 సార్లు అధిక ఉష్ణోగ్రత మరియు అధిక పీడనం మంచి ప్రభావాన్ని కలిగి ఉంటుంది మరియు RNA యొక్క వెలికితీత తక్కువ ప్రభావాన్ని కలిగి ఉంటుంది.

3.ఆల్కహాల్ ప్రోటీన్లను తగ్గించగలదు,కాబట్టి RNA వెలికితీత పట్టికను 75% ఆల్కహాల్‌తో తుడిచివేయవచ్చు , మరియు చేతి తొడుగులు కూడా మద్యంతో స్ప్రే చేయవచ్చు.

4.చివరి RNA కరిగిపోయే ద్రావణం మరియు సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్ కూడా డి-RNase చికిత్స చేయబడాలి.DEPC నీరు సాధారణంగా ఉపయోగించే RNA కరిగిపోయే పరిష్కారం.DEPC నీటి యొక్క సరైన తయారీ విధానం గురించి మాట్లాడుదాం (మీరు కొనుగోలు చేసినప్పుడు వాణిజ్య DEPCని తిరిగి ప్యాకేజ్ చేయాలని గుర్తుంచుకోండి)

1:1000 వద్ద అల్ట్రాపుర్ నీటికి DEPCని జోడించండి, బాగా షేక్ చేయండి, రాత్రిపూట 37 ° C వద్ద నిలబడనివ్వండి మరియు 15 నిమిషాల పాటు అధిక ఉష్ణోగ్రత మరియు అధిక పీడనం కింద 121 ° C వద్ద క్రిమిరహితం చేయండి.DEPC నీటిని 1ml ఆల్కాట్స్‌లో -20°C వద్ద నిల్వ చేయవచ్చు.

చివరగా, సంగ్రహంగా చెప్పాలంటే: తక్కువ ఉష్ణోగ్రత కీలకం, వినియోగ వస్తువులు బాగా నిర్వహించబడతాయి, పూర్తిగా ఆయుధాలు మరియు తక్కువ చర్చ!

సరే, నేటి వ్యూహం అంతే.మీరు పేర్కొన్న అన్ని RNA ఏకాగ్రత మరియు స్వచ్ఛతను నేను కోరుకుంటున్నాను.A260/A280 రెండూ 2.0!!!

వాస్తవానికి, మీరు ఒక ఉపయోగిస్తేగది ఉష్ణోగ్రత ఆపరేషన్ RNA వెలికితీత కిట్, మీరు పై సమస్యలను ఎదుర్కోకపోవచ్చు.

గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద ఆపరేషన్, DNaseని జోడించకుండా, 11 నిమిషాలలో కణాల నుండి మొత్తం RNAను సంగ్రహిస్తుంది మరియు 30 నిమిషాలలో జంతు కణజాలం లేదా మొక్కల నుండి మొత్తం RNAను సంగ్రహిస్తుంది.

ట్రయల్ నమూనాల కోసం, దయచేసి సంప్రదించండి:overseas@foregene.com

సంబంధిత ఉత్పత్తులు:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/