గ్లూ రికవరీని మెరుగుపరచడానికి చిట్కాలు

1. ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ సమయంలో నమూనా లోడ్ని పెంచండి.

2. తాజాగా తయారుచేసిన ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ బఫర్‌ని ఉపయోగించండి.

3. జిగురును కత్తిరించేటప్పుడు, జిగురు కట్టింగ్ వాల్యూమ్‌ను తగ్గించడానికి స్ట్రిప్స్‌తో మాత్రమే జిగురును కత్తిరించడానికి ప్రయత్నించండి: కొన్ని ప్రయోజన శకలాలు కలిగిన జిగురు అవసరం లేదు, లేకుంటే అది రికవరీ రేటును ప్రభావితం చేస్తుంది.

4. రెండు లేదా అంతకంటే ఎక్కువ జిగురు ముక్కలను కరిగిన తర్వాత, వాల్యూమ్ ఎంత పెద్దదైనా ట్యూబ్‌ని ఉపయోగించండి మరియు దానిని అదే కాలమ్‌కు బదిలీ చేయండి.

5. సోల్‌లో జోడించిన ద్రావణం కొంచెం ఎక్కువగా ఉంటుంది, ఇది పొరకు DNA యొక్క బంధానికి మరింత అనుకూలంగా ఉంటుంది, కానీ సాధారణంగా 750ul కంటే మించకూడదు.

6. కాలమ్‌లోని ద్రావణంలోని ఉప్పు సాంద్రత, ఆమ్లత్వం (ఛార్జ్) మరియు హైడ్రోఫోబిసిటీ ద్వారా కాలమ్‌కు DNAను బంధించడం జెల్ రికవరీకి కీలకం.అందువల్ల, ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ బఫర్ యొక్క pH చాలా ఎక్కువగా ఉంటే, 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC)ని సోల్‌కు జోడించవచ్చు;పొరపై DNA అణువులను బాగా అడ్డగించడానికి, జిగురును కరిగిన తర్వాత ద్రవంలోకి వేడి చేయడానికి 30% ఐసోప్రొపనాల్‌ను జోడించవచ్చు.

7. ఎలుయెంట్‌ను జోడించే ముందు, ఇథనాల్ పూర్తిగా ఆవిరైపోవడానికి కొన్ని నిమిషాలు (సుమారు 10 నిమిషాలు) గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద కాలమ్‌ను వదిలివేయండి.

8. చివరగా, రికవరీ వాల్యూమ్‌ను తగ్గించడానికి తక్కువ ఎలుయెంట్‌ని జోడించండి.సాధారణంగా, ఎల్యూషన్ కోసం 30-50μl ఎలుయెంట్ ఉపయోగించబడుతుంది (చాలా తక్కువ కాదు, లేకుంటే అది పొరను తడి చేయదు, ఇది ఎలుషన్‌కు అనుకూలంగా ఉండదు);పొరకు కట్టుబడి ఉన్న DNAను పూర్తిగా ఎలిట్ చేయడానికి ఎలుషన్ చుక్కలు పొర మధ్యలో ఉంటాయి.

9. ఎలుయెంట్‌ను జోడించిన తర్వాత, దానిని 5 నిమిషాల పాటు 55 డిగ్రీల నీటి స్నానంలో ఎల్యూట్ చేయవచ్చు లేదా 10 నిమిషాల కంటే ఎక్కువ 50 డిగ్రీల నీటి స్నానంలో ఉంచవచ్చు లేదా రాత్రిపూట 4 డిగ్రీల వద్ద పారాఫిల్మ్‌తో సీలు చేసి, మరుసటి రోజు కోలుకోవడానికి సెంట్రిఫ్యూజ్ చేయవచ్చు, ప్రభావం మంచిది.

10.అడ్సోర్ప్షన్ కాలమ్‌కు సెంట్రిఫ్యూజ్డ్ ఎలుయేట్‌ను జోడించి మళ్లీ సెంట్రిఫ్యూజ్ చేయండి.

PCR ఉత్పత్తి రికవరీ కోసం వివరణాత్మక పద్ధతులు మరియు విధానాలు

1. సాధారణ రబ్బరు రీసైక్లింగ్

మీరు జిగురును తిరిగి పొందాలనుకుంటే, కిట్‌ను ఉపయోగించడం ఉత్తమం, ఇది సౌకర్యవంతంగా ఉంటుంది మరియు కొంచెం ఎక్కువ రికవరీ రేటును కలిగి ఉంటుంది.మీరు దీన్ని నిజంగా మాన్యువల్‌గా పునరుద్ధరించాల్సిన అవసరం ఉంటే, జిగురును కత్తిరించిన తర్వాత మీరు TE వాల్యూమ్‌కు 3 రెట్లు జోడించవచ్చు.నీటి స్నానంలో కరిగిన తర్వాత, ఫినాల్, ఫినాల్/క్లోరోఫామ్ శుభ్రంగా సంగ్రహించబడతాయి మరియు ఇథనాల్ అవక్షేపించబడుతుంది.అంతే.

2. తక్కువ మెల్టింగ్ పాయింట్ జెల్స్ నుండి DNA రికవరీ

DNA శకలాల శుద్దీకరణ జెల్ వాల్యూమ్‌కు సమానంగా TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA)ని జోడించి, జెల్ పూర్తిగా కరిగిపోయేలా 5 నిమిషాల పాటు 65°C నీటి స్నానంలో ఉంచండి.

గది ఉష్ణోగ్రతకు తీసుకువచ్చిన తర్వాత, సమానమైన ఫినాల్ (TE, TEతో సంతృప్తమై పై పొరలో సీలు చేయబడింది మరియు ఫినాల్ దిగువ పొర తీసివేయబడింది) జోడించబడింది మరియు మిశ్రమాన్ని సున్నితంగా కలపాలి (మిక్సింగ్ అవసరం లేదు), మరియు 3 నిమిషాల పాటు 12,000 rpm వద్ద సెంట్రిఫ్యూజ్ చేయబడింది.1-2 సార్లు రిపీట్ చేయండి.

సూపర్‌నాటెంట్‌ను తీసుకోండి, 0.1 వాల్యూమ్ 3mol/L సోడియం అసిటేట్ (pH 5.2) మరియు 2.5 రెట్లు సంపూర్ణ ఇథనాల్ వాల్యూమ్‌ను ఇథనాల్ అవక్షేపణను నిర్వహించండి.శుద్ధి చేయబడిన DNAను తగిన మొత్తంలో TEతో కరిగించి, కంటెంట్‌ను కొలవండి మరియు ఉపయోగం కోసం సిద్ధం చేయండి (దీనిని లక్ష్య జన్యు నిర్మాణ విశ్లేషణ, ప్రోబ్ తయారీ మొదలైన వాటి కోసం ఉపయోగించవచ్చు).

3. మంచి యాంప్లిఫికేషన్ విశిష్టతతో PCR రికవరీ

PCR యాంప్లిఫికేషన్ యొక్క నిర్దిష్టత మంచిదైతే, ఇది PCR ఉత్పత్తి యొక్క సాధారణ శుద్ధీకరణ మరియు పునరుద్ధరణ మాత్రమే.మీరు PCR ఉత్పత్తికి 50ug/ml ప్రొటీనేజ్ Kని జోడించవచ్చు, 1hకి 37 డిగ్రీలు, ఫినాల్/క్లోరోఫామ్‌తో ఒకసారి ఎక్స్‌ట్రాక్ట్ చేయవచ్చు, ఒకసారి క్లోరోఫామ్‌తో ఎక్స్‌ట్రాక్ట్ చేయవచ్చు మరియు సూపర్‌నాటెంట్ యొక్క 0.1 వాల్యూమ్‌ను జోడించవచ్చు.సోడియం అసిటేట్ 2.5 వాల్యూమ్‌ల సంపూర్ణ ఇథనాల్‌తో అవపాతం ద్వారా తిరిగి పొందబడింది.

సంబంధిత ఉత్పత్తులు:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/