ఇటీవల, నేను అద్భుతమైనదాన్ని కనుగొన్నాను!అతని చుట్టూ ఉన్న చాలా మంది అధునాతన ప్రయోగ నిపుణులకు కొన్ని ప్రాథమిక ప్రయోగాత్మక నాలెడ్జ్ పాయింట్లు కూడా తెలియవు.

ఉదాహరణకు, మీరు ఈ క్రింది ప్రశ్నలకు సమాధానం చెప్పగలరా?

OD260 మరియు A260 మధ్య తేడా ఉందా?ప్రతి దాని అర్థం ఏమిటి?
OD అనేది ఆప్టికల్ డెన్సిటీ (ఆప్టికల్ డెన్సిటీ) యొక్క సంక్షిప్తీకరణ, A అనేది శోషణ (శోషణ) యొక్క సంక్షిప్తీకరణ, రెండు భావనలు వాస్తవానికి ఒకే విధంగా ఉంటాయి, "ఆప్టికల్ డెన్సిటీ" అనేది "శోషణం", కానీ "ఆప్టికల్ డెన్సిటీ" అనేది చాలా జాతీయ ప్రమాణాలకు అనుగుణంగా మరియు మరింత ప్రామాణికంగా ఉంటుంది.

న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ ఏకాగ్రతను లెక్కించడానికి సాధారణంగా మనం OD విలువను 260nm వద్ద కొలుస్తాము, కాబట్టి 1OD దేనిని సూచిస్తుంది?
న్యూక్లియిక్ ఆమ్లం 260nm తరంగదైర్ఘ్యం వద్ద గరిష్ట శోషణ శిఖరాన్ని కలిగి ఉంటుంది, ఇది DNA మరియు RNA రెండింటినీ కలిగి ఉంటుంది, అలాగే ఫ్రాగ్మెంటెడ్ న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ శకలాలు (ఇది కీలక అంశం).
260 nm తరంగదైర్ఘ్యం వద్ద కొలవబడిన OD విలువ OD260గా నమోదు చేయబడింది.నమూనా స్వచ్ఛంగా ఉంటే, OD260 విలువ న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ నమూనా యొక్క ఏకాగ్రతను లెక్కించగలదు.
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (డబుల్ స్ట్రాండెడ్ DNA)
=37 μg/ml ssDNA (సింగిల్ స్ట్రాండెడ్ DNA)
=40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPలు (ఒలిగోన్యూక్లియోటైడ్స్)
RT-PCR, రియల్ టైమ్-PCR మరియు QPCR మధ్య ఏదైనా కనెక్షన్ మరియు తేడా ఉందా?
RT-PCR అనేది రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ PCR కోసం చిన్నది
రియల్ టైమ్ PCR=qPCR, క్వాంటిటేటివ్ రియల్ టైమ్ PCR కోసం చిన్నది
రియల్ టైమ్ PCR (రియల్-టైమ్ ఫ్లోరోసెంట్ క్వాంటిటేటివ్ PCR) మరియు రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ PCR (రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ PCR) రెండూ RT-PCRగా సంక్షిప్తీకరించబడినట్లు కనిపిస్తున్నప్పటికీ.కానీ అంతర్జాతీయ సమావేశం: RT-PCR ప్రత్యేకంగా రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ PCRని సూచిస్తుంది.

జీవశాస్త్రంలో DNA/RNA పొడవును వివరించడానికి సాధారణంగా ఉపయోగించే nt, bp మరియు kb ఏమిటి?
nt = న్యూక్లియోటైడ్
bp = ఆధార జత బేస్ జత
kb = కిలోబేస్

అయితే, చాలా మంది ఈ చిన్న వివరాలను పట్టించుకోరని మీరు చెబుతారు!ప్రతి ఒక్కరూ దీన్ని చేస్తారు, మరియు ఇది ఏమిటని ఎవరూ మిమ్మల్ని అడగరు.ఇది అనవసరమని మీకు తెలుసా, సరియైనదా?

లేదు, లేదు, ఇది తెలుసుకోవడం చాలా అవసరం!దేని వలన?
మీరు ఒక కథనాన్ని పోస్ట్ చేయాలనుకుంటున్నారు కాబట్టి!సోదరా!మీరు గ్రాడ్యుయేషన్‌ని లక్ష్యంగా చేసుకున్నా లేదా శాస్త్రీయ పరిశోధన విజయాలు సాధించాలన్నా, మీరు మాట్లాడేందుకు కథనాలపై ఆధారపడాలి!

న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ వెలికితీత సరళమైన మరియు అత్యంత ప్రాథమిక ప్రయోగంగా ఉండాలి.న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ వెలికితీత నాణ్యత నేరుగా తదుపరి ప్రయోగాల ఫలితాలను నిర్ణయిస్తుంది.

చాలా సార్లు చెప్పినా పట్టించుకోని స్నేహితులు ఇంకా ఎందరో ఉన్నారు.ఈసారి నేను వ్యాసం నుండి బయటకు వెళ్లాలని నిర్ణయించుకున్నాను!

MIQEగా సూచించబడే క్వాంటిటేటివ్ రియల్-టైమ్ PCR ప్రయోగాల ప్రచురణ కోసం కనీస సమాచారం, అనేది అంతర్జాతీయంగా ప్రారంభించబడిన ఫ్లోరోసెన్స్ క్వాంటిటేటివ్ ప్రయోగ మార్గదర్శకాల సమితి, ఇది ఫ్లోరోసెన్స్ క్వాంటిటేటివ్ PCR ప్రయోగాలను మూల్యాంకనం చేయడానికి మరియు కథనాలను ప్రచురించడానికి అవసరమైన ప్రయోగాత్మక సమాచారం కోసం కనీస ప్రమాణాలను ప్రతిపాదిస్తుంది.ప్రయోగాత్మకంగా అందించిన ప్రయోగాత్మక పరిస్థితులు మరియు విశ్లేషణ పద్ధతుల ద్వారా, సమీక్షకులు పరిశోధకుడి ప్రయోగాత్మక పథకం యొక్క ప్రామాణికతను బాగా అంచనా వేయగలరు.

న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ వెలికితీత విభాగంలో, కింది గుర్తింపు అంశాలు ప్రతిపాదించబడినట్లు చూడవచ్చు,

“E” తప్పనిసరిగా అందించాల్సిన సమాచారాన్ని సూచిస్తుంది మరియు “D” అవసరమైతే అందించాల్సిన సమాచారాన్ని సూచిస్తుంది.

రూపం చాలా క్లిష్టంగా ఉంటుంది, వాస్తవానికి, ప్రతి ఒక్కరూ ప్రారంభించాల్సిన అవసరం ఉందని నేను చెప్పాలనుకుంటున్నాను

స్వచ్ఛత (D), దిగుబడి (D), సమగ్రత (E) మరియు స్థిరత్వం (E) ఈ నాలుగు అంశాలలో న్యూక్లియిక్ ఆమ్లాలను అంచనా వేయడానికి.

ప్రయోగాత్మక అలవాట్ల ప్రకారం, మొదట స్వచ్ఛత మరియు ఏకాగ్రత యొక్క మూల్యాంకన పద్ధతుల గురించి మాట్లాడండి.

OD కొలత అనేది ప్రయోగాత్మకులకు ఇష్టమైన మరియు సులభమైన గుర్తింపు పద్ధతి.సూత్రం విషయానికొస్తే, నేను ఇక్కడ వివరాల్లోకి వెళ్లను.అనేక ప్రయోగశాలలు ఇప్పుడు న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ నమూనాలను నేరుగా పరిమాణాత్మకంగా విశ్లేషించడానికి అల్ట్రా-మైక్రో స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్‌లను ఉపయోగిస్తున్నాయి.శోషణ విలువను ప్రదర్శిస్తున్నప్పుడు, ప్రోగ్రామ్ నేరుగా ఏకాగ్రత విలువను (న్యూక్లియిక్ యాసిడ్, ప్రోటీన్ మరియు ఫ్లోరోసెంట్ డై) మరియు సంబంధిత నిష్పత్తులను ఇస్తుంది.OD విలువ విశ్లేషణ కోసం, ఈ చిత్రాన్ని సేవ్ చేయండి మరియు మీరు బాగానే ఉంటారు.

యూనివర్సల్ OD విలువ పరిష్కారాల జాబితా

అయితే, మీ కోసం విడిగా తీసుకురావాల్సిన కొన్ని హెచ్చరికలు ఉన్నాయి.

(అన్నింటికి మించి, మీరు పొదుపు చేసి, మీకు అవసరమైనంత వరకు వేచి ఉండే వారని నాకు తెలుసు!)

గమనిక 1 సామగ్రి

OD విలువ వివిధ పరికరాల ద్వారా ప్రభావితమవుతుంది.OD260 నిర్దిష్ట పరిధిలో ఉన్నంత వరకు, OD230 మరియు OD280 విలువలు అర్థవంతంగా ఉంటాయి.ఉదాహరణకు, 260nm వద్ద సాధారణ Eppendorf D30 యొక్క శోషణ పరిధి 0~3A, మరియు NanoDrop One of Thermo 260nm వద్ద ఉంటుంది.శోషణ పరిధి 0.5~62.5A.

గమనిక 2పలుచన కారకం

OD విలువ వివిధ కారకాల యొక్క పలుచన ద్వారా ప్రభావితమవుతుంది.ఉదాహరణకు, pHలో శుద్ధి చేయబడిన RNA యొక్క OD260/280 రీడింగ్7.5 10మి.మీ ట్రిస్బఫర్ 1.9-2.1 మధ్య ఉంటుందితటస్థ సజల పరిష్కారంనిష్పత్తి తక్కువగా ఉంటుంది, బహుశా 1.8-2.0 మాత్రమే కావచ్చు, కానీ దీని అర్థం RNA యొక్క నాణ్యత తేడాను మారుస్తుందని కాదు.

గమనిక 3అవశేష పదార్థాలు

అవశేష పదార్ధాల ఉనికి న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ ఏకాగ్రత కొలత యొక్క ఖచ్చితత్వాన్ని ప్రభావితం చేస్తుంది, కాబట్టి న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ నమూనాలలో ప్రోటీన్, ఫినాల్, పాలిసాకరైడ్ మరియు పాలీఫెనాల్ అవశేషాలను వీలైనంత వరకు నివారించడం అవసరం.

అయితే, నిజానికి, సేంద్రీయ కారకాలతో వెలికితీత అనేది పాత పద్ధతి.కమర్షియల్ కిట్‌లలో, సంగ్రహణ ప్రభావాన్ని సెంట్రిఫ్యూగేషన్‌తో కలిపి సిలికా-ఆధారిత శోషణ నిలువు వరుస ద్వారా సాధించవచ్చు, తొలగించడం కష్టంగా ఉండే విషపూరితమైన మరియు హానికరమైన ఆర్గానిక్ రియాజెంట్‌లను నివారించడం మొదలైనవి. సమస్య, వంటిఫోర్జీన్ యొక్క న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ ఎక్స్‌ట్రాక్షన్ కిట్, ఆపరేషన్ అంతటా DNase/RNase మరియు టాక్సిక్ ఆర్గానిక్ రియాజెంట్‌లను ఉపయోగించదు, వేగంగా మరియు సురక్షితంగా ఉంటుంది, ఇంకాప్రభావం ఉందిమంచిది(అనుకోకుండా అది బట్టతల అని చెప్పారు, కానీ మీరు తెలుసుకోవాలని నాకు తెలుసు).

ఉదాహరణ 1: జెనోమిక్ DNA వెలికితీత దిగుబడి మరియు స్వచ్ఛత

ఫోర్జీన్ సాయిల్ DNA ఐసోలేషన్ కిట్ (DE-05511) వివిధ వనరుల నుండి మట్టి నమూనాలను పరిగణిస్తుంది మరియు పొందిన జన్యుసంబంధమైన DNA మొత్తం మరియు స్వచ్ఛత క్రింది పట్టికలో చూపబడింది:
ఉదాహరణ 2: కణజాల RNA వెలికితీత దిగుబడి మరియు స్వచ్ఛత

యానిమల్ టోటల్ RNA ఐసోలేషన్ కిట్ (RE-03012) వివిధ కణజాల నమూనాలను ప్రాసెస్ చేసింది మరియు పొందిన RNA మొత్తం మరియు స్వచ్ఛత క్రింది పట్టికలో చూపబడింది (మౌస్ కణజాలం కోసం):
అయితే, మీరు OD విలువతో పూర్తి చేశారని అనుకోకండి.ముందు భాగంలో నేను మీ కోసం గీసిన కీ పాయింట్‌ల గురించి మీకు ఏమైనా శ్రద్ధ ఉందా?

గమనించండి

ఫ్రాగ్మెంటెడ్ న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ అణువులు కూడా శోషణలో లెక్కించబడతాయి.మీరు RNAలో జన్యుసంబంధమైన DNA అవశేషాలను కలిగి ఉన్నారని ఊహిస్తే, మీ OD విలువ చాలా ఎక్కువగా కనిపిస్తుంది, కానీ RNA యొక్క వాస్తవ గాఢతను నిర్ణయించడం సాధ్యం కాదు.మీ RNA కాదా అనేది అధోకరణం ఉందా అనేది స్పష్టంగా తెలియదు, కాబట్టి మరింత ఖచ్చితమైన తీర్పును ఇవ్వడానికి మాకు ఇంకా సమగ్ర మూల్యాంకన పద్ధతి అవసరం, అంటే MIQEలో పేర్కొన్న న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ సమగ్రత మూల్యాంకనం.