మీకు ఎంత తెలుసు

ఎన్ గురించియూక్లియిక్ యాసిడ్ వెలికితీత

శుద్ధి చేయబడిన న్యూక్లియిక్ ఆమ్లం యొక్క ప్రారంభం మరియు ముగింపు

ప్రారంభంలో ప్రతిదీ కష్టంగా ఉంటుంది, శుద్ధి చేయబడిన న్యూక్లియిక్ ఆమ్లం చాలా ఎక్కువ

తదుపరి ప్రయోగాల కోసం పరమాణు ప్రయోగాల ప్రారంభం

విజయం లేదా వైఫల్యం కీలకమైన ప్రభావాన్ని చూపుతుంది.

ట్రేస్/అల్ట్రా-ట్రేస్ UV స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్ చాలా మంది శాస్త్రీయ పరిశోధకులచే అనుకూలంగా ఉంది ఎందుకంటే ఇది న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ గాఢత మరియు ప్రోటీన్ మరియు ఉప్పు అయాన్ అవశేషాలను సులభంగా, త్వరగా మరియు ఆర్థికంగా గుర్తించగలదు.

మనందరికీ తెలిసినట్లుగా, A260 అంటే న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ శోషణ OD విలువ, A280 అంటే ప్రోటీన్ సాంద్రత శోషణ OD విలువ, A230 అంటే ఉప్పు అయాన్ ఏకాగ్రత శోషణ OD విలువ, కాబట్టి A260 న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ గాఢతను మార్చగలదు, A260/280 అంటే ప్రోటీన్ అవశేషాలు, A260/230 అంటే పరిశోధన ఫలితాలు, లవణం ఆధారంగా పెద్ద మొత్తంలో కొలమానం. మరియు అది "సంప్రదాయ” ఇది DNA మరియు RNA యొక్క స్వచ్ఛతను వివరించగలదని నమ్మడానికికొంత మేరకు.న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ దిగుబడి మరియు స్వచ్ఛతను గుర్తించడానికి ఇది ఏకైక ప్రమాణం కాదు, ఇది కేవలం సూచనగా మాత్రమే ఉపయోగించబడుతుంది మరియు ఇది "బంగారు ప్రమాణం" కాదు.

Thermo Fisher ND-2000 మాన్యువల్ పరీక్ష ఫలితాల విశ్వసనీయతను నొక్కి చెబుతుంది

కారణం ఏమిటంటే, మైక్రో/అల్ట్రామైక్రో UV స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్‌ని ఉపయోగించడం ద్వారా పొందిన ఫలితాలు న్యూక్లియిక్ ఆమ్లం యొక్క దిగుబడి మరియు స్వచ్ఛతను మాత్రమే ప్రతిబింబిస్తాయి మరియు అనేక ప్రభావ కారకాలు ఉన్నాయి (ఆప్టికల్ మార్గం, నమూనా వాల్యూమ్, నమూనా ఏకాగ్రత, pH విలువ, శోషణ కొలతను ప్రభావితం చేసే ఇతర అయాన్లు మొదలైనవి) , కొలవబడిన OD విలువ తప్పనిసరిగా ఖచ్చితమైనది కాదు.అదే సమయంలో, శోషణ విలువ నిర్ధారణ పదార్థం యొక్క నిర్దిష్టత లేకపోవడం వల్ల, సింగిల్ స్ట్రాండెడ్ DNA, డబుల్ స్ట్రాండెడ్ DNA, RNA, dNTPలు మరియు కొన్ని ప్రొటీన్‌లు అన్నీ 260nm తరంగదైర్ఘ్యం వద్ద శోషణ శిఖరాలను కలిగి ఉంటాయి మరియు A260 ద్వారా మాత్రమే నిర్ణయించబడిన ఏకాగ్రత నిజమైన DNA లేదా RNA కానవసరం లేదు.ఏకాగ్రత మరియు దాని సమగ్రత మరియు అధోకరణం నిర్ధారించబడవు.

కాబట్టి మన శుద్ధి చేసిన న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ నాణ్యతను ఎలా నిర్ధారించాలి?గుర్తించడం కోసం మైక్రో/అల్ట్రామైక్రో UV స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్‌ను ఉపయోగించడంతో పాటు, న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ యొక్క స్వచ్ఛత మరియు సమగ్రతను దృశ్యమానంగా ప్రదర్శించడానికి మరియు ఏకాగ్రతను కొంత మేరకు సూచించడానికి అగరోస్ జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ వంటి పద్ధతులు కూడా అవసరం.ఈ విధంగా, వివిధ పద్ధతుల గుర్తింపు ఫలితాల నుండి పొందిన న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ దిగుబడి మరియు స్వచ్ఛత నమ్మదగినవి.

ప్రయోగాత్మక చార్ట్ పోలిక

H1299 కణాల జన్యుసంబంధమైన DNA కంపెనీ A యొక్క DNA వెలికితీత కిట్‌లను ఉపయోగించి సంగ్రహించబడింది మరియు గణనీయమైన అశుద్ధ కాలుష్యం కనిపించింది, ఫలితంగా అధిక OD విలువలు

(OD కొలత విలువ మరియు సంబంధిత ఎలెక్ట్రోఫెరోగ్రామ్)

మూల్యాంకన సూచిక

న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ దిగుబడి మరియు నాణ్యత పరీక్ష కోసం "బంగారు ప్రమాణం" ఉందా?

మనకు తెలిసినంతవరకు, సరళమైన, వేగవంతమైన మరియు చౌకైన పద్ధతి లేదు.ఇది స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్, జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ లేదా మాస్ స్పెక్ట్రోమెట్రీ అయినా, అవన్నీ న్యూక్లియిక్ ఆమ్లం యొక్క ఏకాగ్రత మరియు స్వచ్ఛతను వివిధ అంశాల నుండి ప్రతిబింబిస్తాయి మరియు వాటిని ఒకదానికొకటి సూచించడం ద్వారా అంచనా వేయాలి.

ఉత్తమ మూల్యాంకన సూచిక ఎల్లప్పుడూ ఉంటుందితదుపరి ప్రయోగాత్మక అప్లికేషన్.ఇది రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్షన్ మరియు PCR యాంప్లిఫికేషన్ యొక్క సామర్థ్యాన్ని ప్రభావితం చేయదు.నమ్మదగిన యాంప్లిఫికేషన్ ఉత్పత్తులు మరియు Ct విలువలను పొందడం మరియు సీక్వెన్సింగ్ ద్వారా పూర్తి క్రమాన్ని పొందడం అనేది విజయవంతమైన న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ వెలికితీత.

మొత్తానికి, నిష్పత్తి-మాత్రమే సిద్ధాంతం యొక్క దృక్కోణం "మంచి దిగువ ప్రయోగాత్మక ఫలితాలను మంచి వెలికితీత పారామీటర్‌లుగా ఉపయోగించడం" ద్వారా సవాలు చేయబడాలి!

అధిక DNA/RNA స్వచ్ఛతను పొందడానికి సిఫార్సు చేయబడిన Foregene DNA RNA వెలికితీత కిట్‌లు:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/