దారి

లాంగ్ నాన్-కోడింగ్ RNA, lncRNA అనేది 200 న్యూక్లియోటైడ్‌ల కంటే ఎక్కువ పొడవు కలిగిన నాన్-కోడింగ్ RNA, సాధారణంగా 200-100000 nt మధ్య ఉంటుంది.lncRNA జన్యు వ్యక్తీకరణను ఎపిజెనెటిక్, ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ మరియు పోస్ట్-ట్రాన్స్క్రిప్షనల్ స్థాయిలలో నియంత్రిస్తుంది మరియు X క్రోమోజోమ్ సైలెన్సింగ్, జీనోమ్ ప్రింటింగ్ మరియు క్రోమాటిన్ సవరణ, ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ యాక్టివేషన్, ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ జోక్యం, అణు రవాణా, సెల్ సైకిల్ నియంత్రణ, సెల్ డిఫరెన్సియేషన్ క్రమబద్ధీకరణకు సంబంధించిన అనేక ముఖ్యమైన పరిహార ప్రభావాలను ప్రభావితం చేస్తుంది. మానవ వ్యాధుల అభివృద్ధి మరియు నివారణ, మరియు ప్రస్తుతం బయోమెడిసిన్ రంగంలో హాట్ స్పాట్‌లలో ఒకటి.

01  LncRNA రకాలు మరియు లక్షణాలు

పైన చిత్రంలో చూపిన విధంగా lncRNA దాని నిర్మాణం యొక్క వివిధ మూలాల ప్రకారం అనేక రకాలుగా విభజించబడింది.కింది లక్షణాలను కలిగి ఉంది:

1. lncRNAలు సాధారణంగా పొడవుగా ఉంటాయి, డైనమిక్ వ్యక్తీకరణ మరియు భేదం సమయంలో విభిన్న స్ప్లికింగ్ పద్ధతులతో ఉంటాయి
2. కోడింగ్ జన్యువులతో పోలిస్తే, lncRNA సాధారణంగా తక్కువ వ్యక్తీకరణ స్థాయిని కలిగి ఉంటుంది
3. చాలా lncRNAలు కణజాల భేదం మరియు అభివృద్ధి ప్రక్రియలో స్పష్టమైన తాత్కాలిక మరియు ప్రాదేశిక వ్యక్తీకరణ విశిష్టతను కలిగి ఉంటాయి
4. కణితులు మరియు ఇతర వ్యాధులలో లక్షణ వ్యక్తీకరణలు ఉన్నాయి
5. lncRNA యొక్క ఉపకణ స్థానాలు విభిన్నంగా ఉంటాయి
6. పరిరక్షణలో సీక్వెన్స్ తక్కువగా ఉంటుంది, కానీ ఫంక్షన్ కొంత స్థాయి పరిరక్షణను కలిగి ఉంటుంది, మొదలైనవి.

02 LncRNA రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ గురించి తరచుగా అడిగే ప్రశ్నలు

కణాలలో lncRNA యొక్క తక్కువ కంటెంట్, పొడవైన పొడవు మరియు అధిక-స్థాయి నిర్మాణం కారణంగా, అటువంటి RNA తరచుగా స్టెమ్ లూప్స్ లేదా హెయిర్‌పిన్‌ల వంటి సంక్లిష్ట నిర్మాణాలను కలిగి ఉంటుంది మరియు RT-qPCR విజయవంతం కాని రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ లేదా తక్కువ సామర్థ్యంతో సమస్యలకు గురవుతుంది.

03 LncRNA రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్షన్ సొల్యూషన్

కేంద్ర నియమంలో, RNA వైరస్‌లు వాటి స్వంత రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్‌ని ఉపయోగించి DNAను ఒక టెంప్లేట్‌గా ఉపయోగించి DNAను సంశ్లేషణ చేసే ప్రక్రియను రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ అంటారు.విట్రోలో cDNA టెంప్లేట్‌ను సంశ్లేషణ చేయడానికి RNA వైరస్ రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్‌ని ఉపయోగించే ప్రక్రియను రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ అంటారు.రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ సిస్టమ్‌లో చేర్చబడిన ప్రధాన అంశాలు: RNA టెంప్లేట్, రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్, ప్రైమర్‌లు మరియు ఇతర భాగాలు.

1.RNA టెంప్లేట్

రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్‌పై RNA టెంప్లేట్ ప్రభావం దాని నిర్మాణం, స్వచ్ఛత మరియు సమగ్రతలో ప్రతిబింబిస్తుంది.వెలికితీసిన RNA యొక్క స్వచ్ఛత మరియు సమగ్రత, రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ యొక్క అధిక సామర్థ్యం మరియు తదుపరి పరిమాణాత్మక ఫలితాలు మరింత ఖచ్చితమైనవి.సాధారణంగా ఉపయోగించే RNA వెలికితీత కారకాల ద్వారా శుద్ధి చేయబడిన RNA తరచుగా ఆల్కహాల్ మరియు గ్వానిడిన్ లవణాల అవశేషాలను కలిగి ఉంటుంది, ఇవి చాలా రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్‌పై బలమైన నిరోధక ప్రభావాన్ని కలిగి ఉంటాయి.

2.రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్టేజ్

మొత్తం రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ సిస్టమ్‌లో రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్ కీలక ప్రభావాన్ని చూపుతుంది.చాలా ప్రయోగశాలలలో ఉపయోగించే రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్‌కు తగిన ఉష్ణోగ్రత సాధారణంగా 42°C.వాస్తవానికి, అధిక-స్థాయి RNA నిర్మాణాన్ని తెరవడానికి అధిక ఉష్ణోగ్రత అవసరం మరియు రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్ అవసరాలు ఎక్కువగా ఉంటాయి.

3.ప్రైమర్

రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ ప్రైమర్‌లలో జన్యు-నిర్దిష్ట ప్రైమర్‌లు, రాండమ్ ప్రైమర్‌లు మరియు ఒలిగో డిటి ప్రైమర్‌లు ఉన్నాయి.చాలా lncRNAలు polyA టెయిల్‌లను కలిగి ఉండవు మరియు ఒలిగో dTతో యాదృచ్ఛిక ప్రైమర్‌లను సరిగ్గా సరిపోల్చడం ముఖ్యం.

4.ఇతర భాగాలు

RNA అధోకరణం చెందడం చాలా సులభం అనే వాస్తవాన్ని దృష్టిలో ఉంచుకుని, రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ సిస్టమ్‌లోని భాగాల పరిచయం తగ్గించబడుతుంది, ఇది RNase ప్రవేశాన్ని సమర్థవంతంగా నిరోధించగలదు మరియు రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ యొక్క సాఫీగా పురోగతిని నిర్ధారిస్తుంది.

Fఒరేజీన్RNA టెంప్లేట్ నుండి పొందుతుంది, qPCRకి రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్షన్

మీ lncRNA గుర్తింపును సమగ్రంగా ఎస్కార్ట్ చేయండి

జంతు మొత్తం RNA Iపరిష్కారంకిట్ (gDNA తొలగింపు కాలమ్‌తో)

సెల్ మొత్తం RNA Iపరిష్కారంకిట్ (gDNA తొలగింపు కాలమ్‌తో)

Lnc-RT HeroTM I(gDNaseతో)(lncRNA నుండి ఫస్ట్-స్ట్రాండ్ cDNA సంశ్లేషణ కోసం సూపర్ ప్రీమిక్స్)

రియల్ టైమ్ PCR ఈజీ TM-SYBR గ్రీన్ I

Aప్రయోజనాలు ofRNA వెలికితీత:

కిట్ మూడవ తరం RNA వెలికితీత సాంకేతికతను ఉపయోగిస్తుంది, DNaseని ఉపయోగించాల్సిన అవసరం లేదు.

96, 24, 12, మరియు 6-వెల్ ప్లేట్ కల్చర్డ్ సెల్‌ల నుండి 11 నిమిషాలు, gDNA-రహిత, అధిక-స్వచ్ఛత, అధిక-నాణ్యత మొత్తం సెల్ RNA యొక్క అధిక-సామర్థ్య వెలికితీత.

lncRNA రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ యొక్క ప్రయోజనాలు:

జన్యుసంబంధమైన DNA కాలుష్యాన్ని త్వరగా తొలగించడానికి LncRNA కోసం ప్రత్యేకంగా అభివృద్ధి చేయబడిన రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ సిస్టమ్.

రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ సిస్టమ్ అధిక ఉష్ణ స్థిరత్వాన్ని కలిగి ఉంది మరియు ఇప్పటికీ 50°C వద్ద మంచి రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ పనితీరును కలిగి ఉంది.

అధిక GC కంటెంట్ మరియు కాంప్లెక్స్ సెకండరీ స్ట్రక్చర్‌తో టెంప్లేట్‌లను అధిక సామర్థ్యంతో రివర్స్ చేయవచ్చు.

ప్రయోజనాలుof qPCR:

హాట్ స్టార్ట్ Foregene Taq Polymerase అధిక యాంప్లిఫికేషన్ సామర్థ్యం, ​​అధిక యాంప్లిఫికేషన్ సెన్సిటివిటీ మరియు అధిక యాంప్లిఫికేషన్ స్పెసిసిటీని కలిగి ఉంది

ఆప్టిమైజ్ చేయబడిన రియల్ PCR ఈజీ మిక్స్ SYBR గ్రీన్‌ని ఐ అధిక గుర్తింపు సున్నితత్వాన్ని కలిగి ఉంటుంది మరియు దాని ఫ్లోరోసెన్స్ తీవ్రత సారూప్య ఉత్పత్తుల కంటే 3-5 రెట్లు ఉంటుంది, ఇది వివిధ రకాల ఫ్లోరోసెన్స్ పరిమాణాత్మక ప్రయోగాల అవసరాలను తీర్చగలదు.