డైరెక్ట్ PCR అనేది న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ వెలికితీత లేకుండా యాంప్లిఫికేషన్ కోసం జంతు లేదా మొక్కల కణజాలాలను నేరుగా ఉపయోగించే ప్రతిచర్య.అనేక విధాలుగా, డైరెక్ట్ PCR సాధారణ PCR వలె పనిచేస్తుంది

ప్రధాన వ్యత్యాసం ప్రత్యక్ష PCRలో ఉపయోగించే కస్టమ్ బఫర్, న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ వెలికితీత లేకుండా నమూనా నేరుగా PCR ప్రతిచర్యకు లోబడి ఉంటుంది, అయితే ఎంజైమ్‌ల సహనం మరియు ప్రత్యక్ష PCR ప్రతిచర్యలో పాల్గొన్న బఫర్ యొక్క అనుకూలత కోసం సంబంధిత అవసరాలు ఉన్నాయి.

సాధారణ నమూనాలలో ఎక్కువ లేదా తక్కువ PCR నిరోధకాలు ఉన్నప్పటికీ, ప్రత్యక్ష PCR ఇప్పటికీ ఎంజైమ్‌లు మరియు బఫర్‌ల చర్యలో నమ్మకమైన విస్తరణను సాధించగలదు.సాంప్రదాయ PCR ప్రతిచర్యకు టెంప్లేట్‌గా అధిక-నాణ్యత న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ అవసరం, ఇది టెంప్లేట్‌లో ప్రోటీన్లు మరియు ఇతర మలినాలను కలిగి ఉన్నట్లయితే PCR ప్రతిచర్య యొక్క మృదువైన పురోగతిని నిరోధించవచ్చు.డైరెక్ట్ PCR ప్రస్తుతం మాలిక్యులర్ డయాగ్నస్టిక్స్ రంగంలో అత్యంత ప్రజాదరణ పొందిన సాంకేతికతలలో ఒకటి.

01 డైరెక్ట్ PCR నిజానికి జంతువు మరియు మొక్క కోసం ఉపయోగించబడింది

డైరెక్ట్ PCR యొక్క మొట్టమొదటి అప్లికేషన్ జంతువులు మరియు మొక్కల రంగంలో, ఎలుక, పిల్లి, కోడి, కుందేలు, గొర్రెలు, పశువులు మొదలైన వాటి యొక్క రక్తం, కణజాలం మరియు వెంట్రుకలు, మొక్కల ఆకులు మరియు విత్తనాలు మొదలైనవి, జన్యురూపం, జన్యుమార్పిడి, ప్లాస్మిడ్ గుర్తింపు, జన్యు నాకౌట్ విశ్లేషణ, DNA మూలం విశ్లేషణ మరియు ఇతర ఫీల్డ్ SNP గుర్తింపు, జాతుల గుర్తింపు.

ఈ ఫీల్డ్‌లు కొన్ని సాధారణ లక్షణాలను కలిగి ఉన్నాయి, అనగా, లక్ష్య జన్యు కంటెంట్ సాపేక్షంగా ఎక్కువగా ఉంటుంది మరియు న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ వెలికితీత సమస్యాత్మకంగా ఉంటుంది, కాబట్టి ప్రత్యక్ష PCR సమయాన్ని ఆదా చేయడం మరియు ఫలితాలపై స్వల్ప ప్రభావాన్ని చూపడమే కాకుండా ఖర్చును కూడా ఆదా చేస్తుంది.

వ్యాధికారక గుర్తింపు కోసం ఉపయోగించే డైరెక్ట్ PCR ఇటీవలి సంవత్సరాల విషయం, కొన్ని PCR రియాజెంట్ తయారీదారులు ఆవిష్కరణ చేస్తున్నప్పుడు ఈ దిశలో చాలా ప్రయత్నాలు చేశారు.ప్రత్యేకించి ఈ COVID-19 మహమ్మారిలో, SARS-CoV-2 న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ డిటెక్షన్ కిట్ (మల్టిప్లెక్స్ PCR ఫ్లోరోసెంట్ ప్రోబ్ మెథడ్) వంటి అనేక గుర్తింపు ఉత్పత్తులు మార్కెట్లో కనిపించాయి, ఫోర్జీన్ పరిశోధించి అభివృద్ధి చేసింది, ఇది రియల్-టైమ్ RT PCR టెక్నాలజీని (rRT-PCR) ఉపయోగిస్తుంది. లేదా ఒరోఫారింజియల్ శుభ్రముపరచు నమూనాలు.

ఫోర్జీన్ అనేది సాధారణ ORF1ab, N, E మరియువేరియంట్ SARS-CoV-2 B.1.1.7 వంశం (UK), B.1.351 వంశం (ZA), B.1.617 వంశం (IND) మరియు P.1 వంశం (BR) వంటి మానవ నాసోఫారింజియల్ లేదా ఒరోఫారింజియల్ శుభ్రముపరచు నమూనాలలోని న్యూక్లియిక్ ఆమ్లాలు.

02  ప్రత్యక్ష PCR కోసం అవసరమైన కారకాలు

నమూనా లైసేట్

నమూనా లైసేట్‌ను మీరే కాన్ఫిగర్ చేయవచ్చు లేదా కొనుగోలు చేయవచ్చు.లైసేట్ యొక్క వివిధ బ్రాండ్ల కూర్పులో వ్యత్యాసం లైసింగ్ సామర్థ్యాన్ని భిన్నంగా చేస్తుంది, ఆపై లైసింగ్ సమయం కొద్దిగా భిన్నంగా ఉంటుంది.ఉదాహరణకు, జంతు కణజాల నమూనాల తయారీకి, 30 నిమిషాలు లేదా రాత్రిపూట లైసిస్ సాధారణంగా సిఫార్సు చేయబడింది మరియు వైరస్ల కోసం లైసిస్ పరిష్కారం 3-10 నిమిషాల వరకు ఉంటుంది.

PCR మాస్టర్ మిక్స్

నిర్దిష్ట యాంప్లిఫికేషన్‌ను మెరుగుపరచడానికి మరియు యాంప్లిఫికేషన్ సామర్థ్యాన్ని పెంచడానికి హాట్-స్టార్ట్ DNA పాలిమరేస్‌ను ఉపయోగించమని సిఫార్సు చేయబడింది.డైరెక్ట్ PCR యొక్క ప్రధాన భాగం అత్యంత తట్టుకునే పాలిమరేస్.

DNA విస్తరణను ప్రభావితం చేసే నమూనాలోని భాగాలను తొలగించండి లేదా నిరోధించండి

నమూనాను లైసేట్‌తో ప్రాసెస్ చేసిన తర్వాత, ప్రోటీన్లు, లిపిడ్‌లు మరియు ఇతర కణ శిధిలాలు విడుదల చేయబడతాయి, ఈ పదార్థాలు PCR ప్రతిచర్యను నిరోధిస్తాయి.అందువల్ల, ఈ కారకాల ప్రభావాన్ని తగ్గించడానికి ప్రత్యక్ష PCRకి సంబంధిత తొలగింపు లేదా నిరోధకాలు జోడించడం అవసరం.

03  ప్రత్యక్ష PCR యొక్క ఐదు నాలెడ్జ్ పాయింట్ల సేకరణ

మొదటిది, డైరెక్ట్ PCR సాంకేతికత అనేది వివిధ జీవ నమూనాల కోసం ప్రత్యక్ష PCR సాంకేతికత.ఈ సాంకేతిక పరిస్థితిలో, న్యూక్లియిక్ యాసిడ్‌ను వేరు చేయడం మరియు సంగ్రహించడం, నేరుగా కణజాల నమూనాను వస్తువుగా ఉపయోగించడం మరియు PCR ప్రతిచర్యను నిర్వహించడానికి లక్ష్య జన్యు ప్రైమర్‌లను జోడించడం అవసరం లేదు.

రెండవది, డైరెక్ట్ PCR సాంకేతికత అనేది సాంప్రదాయ DNA టెంప్లేట్ యాంప్లిఫికేషన్ టెక్నాలజీ మాత్రమే కాదు, RNA టెంప్లేట్ రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ PCRని కూడా కలిగి ఉంటుంది.

మూడవది, డైరెక్ట్ PCR సాంకేతికత నేరుగా కణజాల నమూనాలపై సాధారణ గుణాత్మక PCR ప్రతిచర్యలను నిర్వహించడమే కాకుండా, రియల్-టైమ్ qPCR ప్రతిచర్యలను కూడా కలిగి ఉంటుంది, దీనికి ప్రతిచర్య వ్యవస్థ బలమైన యాంటీ-బ్యాక్‌గ్రౌండ్ ఫ్లోరోసెన్స్ జోక్య సామర్థ్యాన్ని కలిగి ఉండాలి మరియు ఎండోజెనస్ ఫ్లోరోసెన్స్ వ్యతిరేక సామర్థ్యాన్ని చల్లబరుస్తుంది.

నాల్గవది, డైరెక్ట్ PCR సాంకేతికత ద్వారా లక్ష్యంగా చేసుకున్న నమూనాలకు న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ టెంప్లేట్‌ల విడుదల మాత్రమే అవసరం మరియు PCR ప్రతిచర్యకు ఆటంకం కలిగించే ప్రోటీన్లు, పాలీశాకరైడ్‌లు, ఉప్పు అయాన్లు మొదలైన వాటిని తొలగించవద్దు.సంక్లిష్ట పరిస్థితుల్లో ఎంజైమ్ కార్యకలాపాలు మరియు ప్రతిరూపణ ఖచ్చితత్వాన్ని నిర్ధారించడానికి అద్భుతమైన ప్రతిఘటన మరియు అనుకూలతను కలిగి ఉండటానికి ప్రతిచర్య వ్యవస్థలో న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ పాలిమరేస్ మరియు PCR మిక్స్ అవసరం.

ఐదవది, ఎటువంటి న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ ఎన్‌రిచ్‌మెంట్ ట్రీట్‌మెంట్ లేకుండా డైరెక్ట్ PCR టెక్నాలజీ ద్వారా లక్ష్యంగా చేసుకున్న కణజాల నమూనా మరియు టెంప్లేట్ మొత్తం చాలా తక్కువగా ఉంటుంది, దీనికి ప్రతిచర్య వ్యవస్థ చాలా ఎక్కువ సున్నితత్వం మరియు విస్తరణ సామర్థ్యాన్ని కలిగి ఉండాలి.