PCR ప్రతిచర్యలు చేసేటప్పుడు ప్రతి ఒక్కరూ ఎల్లప్పుడూ అలాంటి లేదా అలాంటి సమస్యలను ఎదుర్కొంటారని నేను నమ్ముతున్నాను, కానీ వాటిలో చాలా వరకు రెండు ప్రధాన సమస్యలుగా వర్గీకరించవచ్చు:

జన్యు టెంప్లేట్ యొక్క చాలా తక్కువ విస్తరణ (యాంప్లిఫికేషన్);
చాలా ఎక్కువ లక్ష్యం కాని జన్యు విస్తరణ.
ఈ సమస్యలను పరిష్కరించడానికి సంకలితాలను ఉపయోగించడం అనేది సాధారణ వ్యూహాలలో ఒకటి.సాధారణంగా సంకలనాల పాత్ర రెండు అంశాలను కలిగి ఉంటుంది:
ద్వితీయ నిర్మాణంజన్యువుల (ద్వితీయ నిర్మాణం);
నాన్-స్పెసిఫిక్ ప్రైమింగ్‌ను తగ్గించండి.
ఈరోజు, ఎడిటర్ PCR ప్రతిచర్యలు మరియు వాటి విధుల్లోని సాధారణ సంకలనాలను క్లుప్తంగా మీకు పరిచయం చేస్తారు.
ద్వితీయ నిర్మాణాన్ని తగ్గించే సంకలనాలు
సల్ఫాక్సైడ్(DMSO)
జన్యు నమూనాలుఅధిక GC కంటెంట్‌తో.అయినప్పటికీ, DMSO టాక్ పాలిమరేస్ కార్యాచరణను కూడా బాగా తగ్గిస్తుంది.అందువల్ల, ప్రతి ఒక్కరూ టెంప్లేట్ యాక్సెసిబిలిటీని మరియు పాలిమరేస్ యొక్క కార్యాచరణను సమతుల్యం చేయాలి.మీ ప్రయోగానికి సరిపోయే ఏకాగ్రతను కనుగొనడానికి మీరు 2% నుండి 10% వరకు DSMO యొక్క విభిన్న సాంద్రతలను ప్రయత్నించవచ్చని ఎడిటర్ సూచిస్తున్నారు.
నాన్-అయానిక్ డిటర్జెంట్లు
0.1-1% ట్రిటాన్ X-100, ట్వీన్ 20 లేదా NP-40 వంటి నాన్-అయానిక్ డిటర్జెంట్లు సాధారణంగా DNA ద్వితీయ నిర్మాణాన్ని తగ్గిస్తాయి.ఇది టెంప్లేట్ జన్యువు యొక్క విస్తరణను పెంచినప్పటికీ, ఇది నాన్-స్పెసిఫిక్ యాంప్లిఫికేషన్ యొక్క ఇబ్బందిని కూడా కలిగిస్తుంది.కాబట్టి, ఈ సంకలనాలు చెత్త లేకుండా తక్కువ-దిగుబడి PCR ప్రతిచర్యలకు బాగా పని చేస్తాయి, కానీ సాపేక్షంగా అపరిశుభ్రమైన PRC ప్రతిచర్యలకు అంత బాగా పని చేయవు.నాన్-అయానిక్ డిటర్జెంట్ల యొక్క మరొక ప్రయోజనం SDS కాలుష్యాన్ని తగ్గించడం.సాధారణంగా DNA వెలికితీత ప్రక్రియలో, SDS PCR దశకు తీసుకురాబడుతుంది, ఇది పాలిమరేస్ యొక్క కార్యాచరణను బాగా నిరోధిస్తుంది.అందువల్ల, ప్రతిచర్యకు 0.5% ట్వీన్-20 లేదా ట్వీన్-40 జోడించడం వలన SDS యొక్క ప్రతికూల ప్రభావాలను తటస్తం చేయవచ్చు.
బీటైన్_
బీటైన్ ద్వితీయ నిర్మాణ నిర్మాణాన్ని తగ్గించడం ద్వారా DNA విస్తరణను మెరుగుపరుస్తుంది మరియు సాధారణంగా వాణిజ్య PCR కిట్‌లకు "మిస్టరీ" అదనంగా ఉంటుంది.మీరు బీటైన్‌ను ఉపయోగించాలనుకుంటే, మీరు బీటైన్ లేదా బీటైన్ మోనో-హైడ్రేట్ (బీటైన్ లేదా బీటైన్ మోనో-హైడ్రేట్) వేయాలి, కానీ బీటైన్ హైడ్రోక్లోరైడ్ (బీటైన్ హెచ్‌సిఎల్) కాదు, తుది సాంద్రత 1-1.7Mకి సర్దుబాటు చేయాలి.బీటైన్ నిర్దిష్టతను మెరుగుపరచడంలో కూడా సహాయపడుతుంది ఎందుకంటే ఇది DNA మెల్టింగ్/DNA డీనాటరేషన్ యొక్క బేస్ పెయిర్ కంపోజిషన్ డిపెండెన్స్‌ను తొలగిస్తుంది.
నాన్-స్పెసిఫిక్ ప్రైమింగ్‌ను తగ్గించడానికి సంకలనాలు
ఫార్మామైడ్
ఫార్మామైడ్ అనేది సాధారణంగా ఉపయోగించే ఆర్గానిక్ PCR సంకలితం.ఇది DNAలో ప్రధాన గాడి మరియు చిన్న గాడితో కలపవచ్చు, తద్వారా మాస్టర్ DNA డబుల్ హెలిక్స్ యొక్క స్థిరత్వాన్ని తగ్గిస్తుంది మరియు DNA యొక్క ద్రవీభవన ఉష్ణోగ్రతను తగ్గిస్తుంది.PCR ప్రయోగాలలో ఉపయోగించే ఫార్మామైడ్ యొక్క గాఢత సాధారణంగా 1%-5% ఉంటుంది.
టెట్రామిథైల్అమ్మోనియం క్లోరైడ్( TMAC)
టెట్రామీథైలామోనియం క్లోరైడ్ హైబ్రిడైజేషన్ (హైబ్రిడైజేషన్ స్పెసిసిటీ) యొక్క విశిష్టతను పెంచుతుంది మరియు DNA యొక్క ద్రవీభవన ఉష్ణోగ్రతను పెంచుతుంది.అందువలన, TMAC నాన్-స్పెసిఫిక్ ప్రైమింగ్‌ను తీసివేయగలదు మరియు DNA మరియు RNA యొక్క తప్పుగా బంధించడాన్ని తగ్గిస్తుంది.మీరు ఉపయోగిస్తేక్షీణించిన ప్రైమర్లుPCR ప్రతిచర్యలో, TMACని జోడించాలని గుర్తుంచుకోండి, ఇది సాధారణంగా 15-100mM గాఢతతో ఉపయోగించబడుతుంది.
ఇతర సాధారణ సంకలనాలు
పైన పేర్కొన్న రెండు వర్గాల సంకలితాలతో పాటు, PCR ప్రతిచర్యలలో చాలా సాధారణ సంకలనాలు ఉన్నాయి, అవి వేర్వేరు విధులను కలిగి ఉన్నప్పటికీ, అవి కూడా చాలా ముఖ్యమైనవి.
మెగ్నీషియం అయాన్
మెగ్నీషియం అయాన్ అనేది పాలిమరేస్ యొక్క ఒక అనివార్యమైన కోఫాక్టర్ (కోఫాక్టర్), అంటే మెగ్నీషియం అయాన్ లేకుండా, పాలిమరేస్ క్రియారహితంగా ఉంటుంది.అయినప్పటికీ, చాలా ఎక్కువ మెగ్నీషియం అయాన్లు కూడా పాలిమరేస్ యొక్క సామర్థ్యాన్ని ప్రభావితం చేస్తాయి.ప్రతి PCR ప్రతిచర్యలో మెగ్నీషియం అయాన్ల సాంద్రత మారుతూ ఉంటుంది.చెలేటింగ్ ఏజెంట్లు (EDTA లేదా సిట్రేట్ వంటివి), dNTPలు మరియు ప్రొటీన్‌ల ఏకాగ్రత అన్నీ మెగ్నీషియం అయాన్‌ల సాంద్రతను ప్రభావితం చేస్తాయి.కాబట్టి, మీ PCR ప్రయోగంలో మీకు సమస్యలు ఉంటే, మీరు వేర్వేరు మెగ్నీషియం అయాన్ సాంద్రతలను మార్చడానికి ప్రయత్నించవచ్చు, ఉదాహరణకు, 1.0 నుండి 4.0mM వరకు, మధ్యలో 0.5–1mM విరామం ఉంటుంది.
బహుళ ఫ్రీజ్-థా చక్రాలు మెగ్నీషియం క్లోరైడ్ ద్రావణం యొక్క ఏకాగ్రత స్తరీకరణకు దారితీస్తాయని గమనించాలి.అందువల్ల, మీరు ప్రతి ఉపయోగం ముందు పూర్తిగా కరిగించి, దానిని ఉపయోగించే ముందు బాగా కలపాలి.
బోవిన్ సీరం అల్బుమిన్(బోవిన్ అల్బుమిన్, BSA)
మాలిక్యులర్ కెమిస్ట్రీ ప్రయోగాలలో, బోవిన్ సీరం అల్బుమిన్ చాలా సాధారణ సంకలితం, ముఖ్యంగా పరిమితి ఎంజైమ్ జీర్ణక్రియ మరియు PCR ప్రయోగాలలో.PCR ప్రతిచర్యలలో, ఫినోలిక్ సమ్మేళనాలు వంటి కలుషితాలను తగ్గించడంలో BSA సహాయపడుతుంది.మరియు ఇది టెస్ట్ ట్యూబ్ యొక్క గోడకు రియాక్టెంట్ల సంశ్లేషణను తగ్గించగలదని కూడా చెప్పబడింది.PCR ప్రతిచర్యలో, సాధారణంగా జోడించిన BSA యొక్క గాఢత 0.8 mg/mlకు చేరుకుంటుంది.
 
సంబంధిత ఉత్పత్తులు:
పిసిఆర్ హీరో(రంగుతో)
పిసిఆర్ హీరో