Ct విలువ అనేది ఫ్లోరోసెంట్ క్వాంటిటేటివ్ PCR యొక్క అత్యంత ముఖ్యమైన ఫలిత ప్రదర్శన రూపం.ఇది జన్యు వ్యక్తీకరణ వ్యత్యాసాలను లేదా జన్యు కాపీ సంఖ్యను లెక్కించడానికి ఉపయోగించబడుతుంది.కాబట్టి ఫ్లోరోసెన్స్ క్వాంటిఫికేషన్ యొక్క Ct విలువ సహేతుకంగా పరిగణించబడుతుంది?Ct విలువ యొక్క ప్రభావవంతమైన పరిధిని ఎలా నిర్ధారించాలి?

Ct విలువ అంటే ఏమిటి?
qPCR యాంప్లిఫికేషన్ ప్రక్రియలో, యాంప్లిఫైడ్ ఉత్పత్తి యొక్క ఫ్లోరోసెన్స్ సిగ్నల్ సెట్ ఫ్లోరోసెన్స్ థ్రెషోల్డ్‌కు చేరుకున్నప్పుడు సంబంధిత యాంప్లిఫికేషన్ సైకిల్స్ (సైకిల్ థ్రెషోల్డ్) సంఖ్య.C అంటే సైకిల్ మరియు T అంటే థ్రెషోల్డ్.సరళంగా చెప్పాలంటే, Ct విలువ అనేది ప్రారంభ టెంప్లేట్ యాంప్లిఫికేషన్ qPCRలో నిర్దిష్ట మొత్తంలో ఉత్పత్తికి చేరుకున్నప్పుడు దానికి సంబంధించిన చక్రాల సంఖ్య."కొంత మొత్తంలో ఉత్పత్తి" అని పిలవబడేది తరువాత వివరించబడుతుంది.

Ct విలువ ఏమి చేస్తుంది?

1.ఘాతాంక యాంప్లిఫికేషన్, టెంప్లేట్ మొత్తం మరియు Ct విలువ మధ్య సంబంధం
ఆదర్శవంతంగా, qPCRలోని జన్యువులు నిర్దిష్ట సంఖ్యలో చక్రాల తర్వాత ఎక్స్‌పోనెన్షియల్ యాంప్లిఫికేషన్ ద్వారా సేకరించబడతాయి.యాంప్లిఫికేషన్ సైకిల్స్ సంఖ్య మరియు ఉత్పత్తుల మొత్తానికి మధ్య ఉన్న సంబంధం: యాంప్లిఫైడ్ ప్రోడక్ట్ మొత్తం = ప్రారంభ టెంప్లేట్ మొత్తం × (1+En) సైకిల్స్ సంఖ్య.అయినప్పటికీ, qPCR ప్రతిచర్య ఎల్లప్పుడూ ఆదర్శవంతమైన పరిస్థితిలో ఉండదు.విస్తరించిన ఉత్పత్తి మొత్తం "నిర్దిష్ట ఉత్పత్తి మొత్తం"కి చేరుకున్నప్పుడు, ఈ సమయంలో ఉన్న చక్రాల సంఖ్య Ct విలువ మరియు ఇది ఘాతాంక యాంప్లిఫికేషన్ వ్యవధిలో ఉంటుంది.Ct విలువ మరియు ప్రారంభ టెంప్లేట్ మొత్తానికి మధ్య సంబంధం: టెంప్లేట్ యొక్క Ct విలువ మరియు టెంప్లేట్ యొక్క ప్రారంభ కాపీ సంఖ్య యొక్క లాగరిథమ్ మధ్య సరళ సంబంధం ఉంది.ప్రారంభ టెంప్లేట్ ఏకాగ్రత ఎక్కువ, Ct విలువ చిన్నది;ప్రారంభ టెంప్లేట్ ఏకాగ్రత తక్కువగా ఉంటే, Ct విలువ పెద్దది.

2.యాంప్లిఫికేషన్ కర్వ్, ఫ్లోరోసెన్స్ థ్రెషోల్డ్ మరియు నిర్దిష్ట PCR ఉత్పత్తి మొత్తం
qPCR యాంప్లిఫికేషన్ ఉత్పత్తి మొత్తం నేరుగా ఫ్లోరోసెంట్ సిగ్నల్ రూపంలో ప్రదర్శించబడుతుంది, అంటే యాంప్లిఫికేషన్ కర్వ్.PCR యొక్క ప్రారంభ దశలో, యాంప్లిఫికేషన్ ఆదర్శ పరిస్థితుల్లో ఉంటుంది, చక్రాల సంఖ్య తక్కువగా ఉంటుంది, ఉత్పత్తి సంచితం తక్కువగా ఉంటుంది మరియు ఫ్లోరోసెన్స్ స్థాయిని ఫ్లోరోసెన్స్ నేపథ్యం నుండి స్పష్టంగా గుర్తించలేము.ఆ తరువాత, ఫ్లోరోసెన్స్ పెరుగుతుంది మరియు ఘాతాంక దశలోకి ప్రవేశిస్తుంది.PCR ప్రతిచర్య కేవలం ఘాతాంక దశలో ఉన్నప్పుడు PCR ఉత్పత్తి మొత్తాన్ని ఒక నిర్దిష్ట సమయంలో గుర్తించవచ్చు, దీనిని "నిర్దిష్ట మొత్తంలో ఉత్పత్తి"గా ఉపయోగించవచ్చు మరియు టెంప్లేట్ యొక్క ప్రారంభ కంటెంట్‌ను దీని నుండి తీసివేయవచ్చు.అందువల్ల, నిర్దిష్ట మొత్తంలో ఉత్పత్తికి సంబంధించిన ఫ్లోరోసెన్స్ సిగ్నల్ తీవ్రత ఫ్లోరోసెన్స్ థ్రెషోల్డ్.

PCR చివరి దశలో, యాంప్లిఫికేషన్ కర్వ్ ఇకపై ఎక్స్‌పోనెన్షియల్ యాంప్లిఫికేషన్‌ను చూపదు మరియు సరళ దశ మరియు పీఠభూమి దశలోకి ప్రవేశిస్తుంది.

3.Ct విలువల పునరుత్పత్తి
PCR చక్రం Ct విలువ యొక్క సైకిల్ సంఖ్యను చేరుకున్నప్పుడు, అది ఇప్పుడే నిజమైన ఎక్స్‌పోనెన్షియల్ యాంప్లిఫికేషన్ వ్యవధిలోకి ప్రవేశించింది.ఈ సమయంలో, చిన్న లోపం విస్తరించబడలేదు, కాబట్టి Ct విలువ యొక్క పునరుత్పాదకత అద్భుతమైనది, అంటే, ఒకే టెంప్లేట్ వేర్వేరు సమయాల్లో లేదా అదే సమయంలో వేర్వేరు ట్యూబ్‌లలో విస్తరించబడుతుంది.యాంప్లిఫికేషన్, పొందిన Ct విలువ స్థిరంగా ఉంటుంది.

1.యాంప్లిఫికేషన్ సామర్థ్యం En
PCR యాంప్లిఫికేషన్ సామర్థ్యం అనేది పాలిమరేస్ జన్యువును యాంప్లికాన్‌గా మార్చే సామర్థ్యాన్ని సూచిస్తుంది.ఒక DNA అణువు రెండు DNA అణువులుగా రూపాంతరం చెందినప్పుడు విస్తరణ సామర్థ్యం 100%.యాంప్లిఫికేషన్ సామర్థ్యం సాధారణంగా ఎన్‌గా వ్యక్తీకరించబడుతుంది.తదుపరి కథనాల విశ్లేషణను సులభతరం చేయడానికి, యాంప్లిఫికేషన్ సామర్థ్యాన్ని ప్రభావితం చేసే కారకాలు క్లుప్తంగా పరిచయం చేయబడ్డాయి.

2.Ct విలువల పరిధి
Ct విలువలు 15-35 వరకు ఉంటాయి.Ct విలువ 15 కంటే తక్కువగా ఉన్నట్లయితే, ఆమ్ప్లిఫికేషన్ బేస్‌లైన్ వ్యవధి పరిధిలో ఉందని మరియు ఫ్లోరోసెన్స్ థ్రెషోల్డ్‌ని చేరుకోలేదని పరిగణించబడుతుంది.ఆదర్శవంతంగా, Ct విలువ మరియు టెంప్లేట్ యొక్క ప్రారంభ కాపీ సంఖ్య యొక్క లాగరిథమ్ మధ్య సరళ సంబంధం ఉంది, అంటే ప్రామాణిక వక్రరేఖ.ప్రామాణిక వక్రరేఖ ద్వారా, యాంప్లిఫికేషన్ సామర్థ్యం 100% ఉన్నప్పుడు, జన్యువు యొక్క సింగిల్ కాపీ సంఖ్యను లెక్కించడానికి లెక్కించిన Ct విలువ సుమారు 35. ఇది 35 కంటే ఎక్కువ ఉంటే, టెంప్లేట్ యొక్క ప్రారంభ కాపీ సంఖ్య సిద్ధాంతపరంగా 1 కంటే తక్కువగా ఉంటుంది, ఇది అర్థరహితంగా పరిగణించబడుతుంది.

వివిధ జన్యు Ct పరిధుల కోసం, జన్యు కాపీ సంఖ్య మరియు ప్రారంభ టెంప్లేట్ మొత్తంలో యాంప్లిఫికేషన్ సామర్థ్యంలో వ్యత్యాసం కారణంగా, జన్యువు కోసం ప్రామాణిక వక్రరేఖను తయారు చేయడం మరియు జన్యువు యొక్క సరళ గుర్తింపు పరిధిని లెక్కించడం అవసరం.

3.Ct విలువను ప్రభావితం చేసే కారకాలు
యాంప్లిఫికేషన్ సైకిల్స్ సంఖ్య మరియు ఉత్పత్తి మొత్తం మధ్య సంబంధం నుండి: విస్తరించిన ఉత్పత్తి మొత్తం = ప్రారంభ టెంప్లేట్ మొత్తం × (1+En) సైకిల్ సంఖ్య, ఆదర్శ పరిస్థితుల్లో, ప్రారంభ టెంప్లేట్ మరియు En మొత్తం Ct విలువపై ప్రతికూల ప్రభావాన్ని చూపుతాయని చూడవచ్చు.టెంప్లేట్ నాణ్యత లేదా యాంప్లిఫికేషన్ సామర్థ్యంలో వ్యత్యాసం Ct విలువ చాలా పెద్దదిగా లేదా చాలా చిన్నదిగా ఉంటుంది.

4.Ct విలువ చాలా పెద్దది లేదా చాలా చిన్నది