సమస్య విశ్లేషణ గైడ్

మీ ప్రయోగాలకు సహాయకరంగా ఉండాలనే ఆశతో, వైరల్ DNA/RNA వెలికితీతలో ఎదురయ్యే సమస్యల విశ్లేషణ క్రిందిది.అదనంగా, ఆపరేషన్ సూచనలు మరియు సమస్య విశ్లేషణ కాకుండా ఇతర ప్రయోగాత్మక లేదా సాంకేతిక సమస్యల కోసం, మీకు సహాయం చేయడానికి మేము ప్రత్యేక సాంకేతిక మద్దతును కలిగి ఉన్నాము.మీకు ఏవైనా అవసరాలు ఉంటే, దయచేసి మమ్మల్ని సంప్రదించండి: 028-83360257 లేదా ఇ-మెయిల్:

Tech@foregene.com.

న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ వెలికితీత లేదా తక్కువ న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ దిగుబడి లేదు

సాధారణంగా రికవరీ సామర్థ్యాన్ని ప్రభావితం చేసే అనేక అంశాలు ఉన్నాయి, అవి: నమూనా న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ కంటెంట్, ఆపరేషన్ పద్ధతి, ఎలుషన్ వాల్యూమ్ మొదలైనవి.

సాధారణ కారణాల విశ్లేషణ:

1. ప్రక్రియ సమయంలో మంచు స్నానం లేదా తక్కువ ఉష్ణోగ్రత (4 ° C) సెంట్రిఫ్యూగేషన్ నిర్వహించబడింది.

సూచన: మొత్తం ప్రక్రియలో గది ఉష్ణోగ్రత (15-25°C) వద్ద పనిచేయండి, మంచు స్నానం మరియు తక్కువ ఉష్ణోగ్రత సెంట్రిఫ్యూగేషన్ చేయవద్దు.

2. నమూనా సరిగ్గా నిల్వ చేయబడింది లేదా నమూనా చాలా కాలం పాటు నిల్వ చేయబడింది.

సిఫార్సు: -80 ° C వద్ద నమూనాలను నిల్వ చేయండి మరియు పునరావృతం గడ్డకట్టడం మరియు కరిగిపోకుండా ఉండండి;న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ వెలికితీత కోసం తాజాగా సేకరించిన నమూనాలను ఉపయోగించడానికి ప్రయత్నించండి.

3. సరిపోని నమూనా లైసిస్.

సిఫార్సు: దయచేసి నమూనా మరియు లైసిస్ వర్కింగ్ సొల్యూషన్ పూర్తిగా మిక్స్ చేయబడి, గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద (15-25°C) 10 నిమిషాల పాటు పొదిగేలా చూసుకోండి.

4. ఎలుయెంట్ యొక్క తప్పు జోడింపు.

సూచన: RNase-Free ddH2O ప్యూరిఫికేషన్ కాలమ్ మెమ్బ్రేన్ మధ్యలో డ్రాప్‌వైస్‌గా జోడించబడిందని నిర్ధారించుకోండి మరియు దానిని ప్యూరిఫికేషన్ కాలమ్ రింగ్‌పై వదలకండి.

5. సంపూర్ణ ఇథనాల్ యొక్క సరైన వాల్యూమ్ బఫర్ RW2కి జోడించబడలేదు.

సూచన: దయచేసి సూచనలను అనుసరించండి, బఫర్ RW2కి సంపూర్ణ ఇథనాల్ యొక్క సరైన వాల్యూమ్‌ను జోడించి, కిట్‌ను ఉపయోగించే ముందు బాగా కలపండి.

6. తగని నమూనా వాల్యూమ్.

సూచన: ప్రతి 500µl బఫర్ DRL కోసం 200µl నమూనా ప్రాసెస్ చేయబడుతుంది.అధిక నమూనా ప్రాసెసింగ్ న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ వెలికితీత దిగుబడిని తగ్గిస్తుంది.

7. సరికాని ఎలుషన్ వాల్యూమ్ లేదా అసంపూర్ణ ఎలుషన్.

సిఫార్సు: శుద్దీకరణ కాలమ్ యొక్క ఎలుయెంట్ వాల్యూమ్ 30-50μl;ఎలుషన్ ప్రభావం సంతృప్తికరంగా లేకుంటే, ముందుగా వేడిచేసిన RNase-Free ddH2Oని జోడించిన తర్వాత గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద సమయాన్ని పొడిగించాలని సిఫార్సు చేయబడింది, ఉదాహరణకు 5-10నిమి.

8. బఫర్ RW2తో కడిగిన తర్వాత కాలమ్‌పై ఇథనాల్ ఉంటుంది.

సూచన: బఫర్ RW2తో సెంట్రిఫ్యూగేషన్ తర్వాత ఇథనాల్ 2 నిమిషాల పాటు మిగిలి ఉంటే, అవశేష ఇథనాల్‌ను పూర్తిగా తొలగించడానికి సెంట్రిఫ్యూగేషన్ తర్వాత 5 నిమిషాల పాటు గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద నిలువు వరుసను ఉంచవచ్చు.

శుద్ధి చేయబడిన న్యూక్లియిక్ ఆమ్లం క్షీణిస్తుంది

శుద్ధి చేయబడిన న్యూక్లియిక్ ఆమ్లం యొక్క నాణ్యత నమూనా యొక్క సంరక్షణ, RNase కాలుష్యం, ఆపరేషన్ మరియు ఇతర కారకాలకు సంబంధించినది.సాధారణ కారణాల విశ్లేషణ:

1. సేకరించిన నమూనాలు సకాలంలో నిల్వ చేయబడవు.

సూచన: సేకరించిన తర్వాత నమూనా సకాలంలో ఉపయోగించబడకపోతే, దయచేసి దానిని -80°C వద్ద వెంటనే తక్కువ ఉష్ణోగ్రత వద్ద నిల్వ చేయండి.RNA వెలికితీత కోసం, తాజాగా సేకరించిన నమూనాలను ఉపయోగించడానికి ప్రయత్నించండి.

2. నమూనాలను సేకరించి, స్తంభింపజేయండి మరియు పదేపదే కరిగించండి.

సూచన: నమూనాల సేకరణ మరియు నిల్వ సమయంలో గడ్డకట్టడం మరియు కరిగించడం (ఒకసారి కంటే ఎక్కువ కాదు) నివారించండి, లేకుంటే న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ దిగుబడి తగ్గుతుంది.

3. ఆపరేషన్ గదిలో RNase ప్రవేశపెట్టబడింది లేదా పునర్వినియోగపరచలేని చేతి తొడుగులు, ముసుగులు మొదలైనవి ధరించరు.

సిఫార్సు: RNA వెలికితీత ప్రయోగాలు ప్రత్యేక RNA ఆపరేషన్ గదిలో ఉత్తమంగా నిర్వహించబడతాయి మరియు ప్రయోగానికి ముందు ప్రయోగశాల పట్టికను శుభ్రం చేయాలి.

RNaseని చాలా వరకు ప్రవేశపెట్టడం వల్ల కలిగే RNA క్షీణతను నివారించడానికి ప్రయోగం సమయంలో డిస్పోజబుల్ గ్లోవ్స్ మరియు మాస్క్‌లను ధరించండి.

4. రియాజెంట్ ఉపయోగంలో RNaseతో కలుషితమైంది.

సిఫార్సు: సంబంధిత ప్రయోగాల కోసం కొత్త వైరల్ DNA/RNA ఐసోలేషన్ కిట్‌తో భర్తీ చేయండి.

5. RNA మానిప్యులేషన్ కోసం ఉపయోగించే సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్‌లు మరియు పైపెట్ చిట్కాలు RNaseతో కలుషితమయ్యాయి.

సూచన: RNA వెలికితీత కోసం ఉపయోగించే సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్‌లు, పైపెట్ చిట్కాలు, పైపెట్‌లు మొదలైనవన్నీ RNase-రహితంగా ఉన్నాయని నిర్ధారించుకోండి.

శుద్ధి చేయబడిన న్యూక్లియిక్ ఆమ్లం దిగువ ప్రయోగాలను ప్రభావితం చేస్తుంది

శుద్ధి కాలమ్ ద్వారా DNA మరియు RNA శుద్ధి చేయబడితే, ఉప్పు అయాన్ మరియు ప్రోటీన్ కంటెంట్ చాలా ఎక్కువగా ఉంటే, అది క్రింది ప్రయోగాలను ప్రభావితం చేస్తుంది, అవి: PCR యాంప్లిఫికేషన్, రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ మొదలైనవి.

1. ఎలుటెడ్ DNA మరియు RNA అవశేష ఉప్పు అయాన్లను కలిగి ఉంటాయి.

సూచన: బఫర్ RW2కి సంపూర్ణ ఇథనాల్ యొక్క సరైన వాల్యూమ్ జోడించబడిందని నిర్ధారించుకోండి మరియు ఆపరేటింగ్ సూచనలలో పేర్కొన్న సెంట్రిఫ్యూగేషన్ వేగంతో రెండుసార్లు శుద్దీకరణ కాలమ్‌ను కడగాలి;ఉప్పు అయాన్ కాలుష్యాన్ని తగ్గించడానికి సెంట్రిఫ్యూగేషన్ చేయండి.

2. ఎలుటెడ్ DNA మరియు RNA ఇథనాల్ అవశేషాలను కలిగి ఉంటాయి.

సూచన: బఫర్ RW2తో వాషింగ్ను నిర్ధారించిన తర్వాత, ఆపరేటింగ్ సూచనలలో సెంట్రిఫ్యూగేషన్ వేగంతో ఖాళీ ట్యూబ్ సెంట్రిఫ్యూగేషన్ను నిర్వహించండి;ఇంకా ఇథనాల్ అవశేషాలు ఉంటే, మీరు ఖాళీ ట్యూబ్‌ను సెంట్రిఫ్యూజ్ చేసి, ఆపై గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 5 నిమిషాల పాటు ఉంచి ఇథనాల్ అవశేషాలను చాలా వరకు తొలగించవచ్చు.

ఇన్‌స్ట్రక్షన్ మాన్యువల్‌లు:

వైరల్ DNA&RNA ఐసోలేషన్ కిట్ ఇన్‌స్ట్రక్షన్ మాన్యువల్