సమస్య విశ్లేషణ గైడ్

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

తక్కువ దిగుబడి లేదా DNA లేదు

నమూనా యొక్క మూలం, నమూనా వయస్సు, నమూనా నిల్వ పరిస్థితులు మరియు ఆపరేషన్‌తో సహా జన్యుసంబంధమైన DNA యొక్క దిగుబడిని ప్రభావితం చేసే అనేక అంశాలు సాధారణంగా ఉన్నాయి.

వెలికితీత సమయంలో జన్యుసంబంధమైన DNA పొందబడలేదు

1. కణజాల నమూనాలు సరిగ్గా నిల్వ చేయబడవు లేదా చాలా కాలం పాటు నిల్వ చేయబడతాయి, ఫలితంగా జన్యుసంబంధమైన DNA క్షీణిస్తుంది.

సిఫార్సు: కణజాల నమూనాలను ద్రవ నత్రజని లేదా -20లో నిల్వ చేయండి°సి;జన్యుసంబంధమైన DNA వెలికితీత కోసం కొత్తగా సేకరించిన నమూనాలను ఉపయోగించడానికి ప్రయత్నించండి.

2. చాలా తక్కువ నమూనా మొత్తం సంబంధిత జన్యుసంబంధమైన DNA సంగ్రహించబడకుండా ఉండవచ్చు.

సూచన: చాలా కాలం పాటు నిల్వ చేయబడిన లేదా తీవ్రమైన జన్యుసంబంధమైన DNA క్షీణత కలిగిన కణజాల నమూనాల కోసం, గణనీయమైన జన్యుసంబంధమైన DNAని సేకరించేందుకు కణజాల నమూనాల మొత్తాన్ని తగిన విధంగా పెంచవచ్చు.నమూనా మొత్తం DNA అవసరాలకు అనుగుణంగా నిర్ణయించబడుతుంది, అయితే తాజా నమూనా 100mg మించకూడదు మరియు పొడి నమూనా 30mg కంటే ఎక్కువ ఉండకూడదు.

3. నమూనా ద్రవ నత్రజనితో గ్రౌండ్ చేయబడదు లేదా ద్రవ నత్రజని తర్వాత చాలా కాలం పాటు ఉంచబడుతుంది.

సూచన: DNA వెలికితీత సమయంలో, సెల్ గోడను విచ్ఛిన్నం చేయడానికి నమూనాను ద్రవ నైట్రోజన్‌తో పూర్తిగా గ్రౌండ్ చేయాలి;గ్రైండింగ్ తర్వాత, దయచేసి నమూనా పొడిని 65 వద్ద ముందుగా వేడి చేసిన PL1కి బదిలీ చేయండి°C వీలైనంత త్వరగా (గ్రౌండ్ పౌడర్ కరిగిన తర్వాత, జన్యుసంబంధమైన DNA వేగంగా క్షీణించడం ప్రారంభమవుతుంది) .

4. ఫోర్జీన్ ప్రోటీజ్ యొక్క సరికాని నిల్వ తగ్గిన లేదా నిష్క్రియాత్మక కార్యాచరణకు దారితీస్తుంది.

సిఫార్సు: ఫోర్జీన్ ప్రోటీజ్ నిల్వ పరిస్థితులను నిర్ధారించండి లేదా ఎంజైమాటిక్ జలవిశ్లేషణ కోసం కొత్త ఫోర్జీన్ ప్రోటీజ్‌తో భర్తీ చేయండి.

5. కిట్ సరిగ్గా నిల్వ చేయబడదు లేదా చాలా కాలం పాటు నిల్వ చేయబడుతుంది, దీని వలన కిట్‌లోని కొన్ని భాగాలు విఫలమవుతాయి.

సిఫార్సు: సంబంధిత కార్యకలాపాల కోసం కొత్త ప్లాంట్ జెనోమిక్ DNA వెలికితీత కిట్‌ను కొనుగోలు చేయండి.

6. కిట్ యొక్క సరికాని ఉపయోగం.

సూచన: మొక్కల జన్యుసంబంధమైన DNA యొక్క వెలికితీత మరియు శుద్దీకరణ కోసం నమూనాలకు అంకితమైన ప్లాంట్ DNA ఐసోలేషన్ కిట్‌ను కొనుగోలు చేయండి.

7. ఒక జోడించకుండానే బఫర్ WBజలరహిత ఇథనాల్.

సిఫార్సు: బఫర్ WBకి సంపూర్ణ ఇథనాల్ యొక్క సరైన వాల్యూమ్‌ను జోడించినట్లు నిర్ధారించుకోండి.

8. సిలికా పొరపై ఎలుయెంట్ సరిగ్గా పడలేదు.

సూచన: 65 వద్ద ముందుగా వేడిచేసిన ఎలుయెంట్‌ను జోడించండి℃సిలికా జెల్ మెమ్బ్రేన్ మధ్యలో డ్రాప్‌వైజ్ చేసి, ఎల్యూషన్ సామర్థ్యాన్ని పెంచడానికి గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 5 నిమిషాలు వదిలివేయండి.

తక్కువ-దిగుబడి జెనోమిక్ DNA పొందేందుకు సంగ్రహణ

1. నమూనా సరిగ్గా నిల్వ చేయబడదు లేదా చాలా కాలం పాటు నిల్వ చేయబడుతుంది, దీని ఫలితంగా జన్యుసంబంధమైన DNA క్షీణిస్తుంది.

సిఫార్సు: కణజాల నమూనాలను -20 వద్ద నిల్వ చేయండి℃;జన్యుసంబంధమైన DNA వెలికితీత కోసం కొత్తగా సేకరించిన కణజాల నమూనాలను ఉపయోగించడానికి ప్రయత్నించండి.

2. కణజాల నమూనాల పరిమాణం చాలా తక్కువగా ఉంటే, సేకరించిన జన్యుసంబంధమైన DNA తక్కువగా ఉంటుంది.

సూచన: కొన్ని మొక్కల నమూనాలు నీటిలో సమృద్ధిగా ఉంటాయి, ఆల్గే మొదలైన జల మొక్కలు వంటివి, మోతాదును తగిన విధంగా పెంచవచ్చు లేదా ఆపరేషన్‌కు ముందు నీటిని కొద్దిగా డీహైడ్రేట్ చేయవచ్చు.

3. నమూనాలను ద్రవ నత్రజనితో పూర్తిగా గ్రౌండింగ్ చేయలేదు లేదా గ్రౌండింగ్ తర్వాత చాలా కాలం పాటు గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద ఉంచారు.

సూచన: ద్రవ నత్రజని గ్రౌండింగ్ తగినంతగా ఉండాలి మరియు నమూనా సెల్ గోడను వీలైనంత వరకు విచ్ఛిన్నం చేయాలి;గ్రౌండింగ్ చేసిన వెంటనే, నమూనా పొడిని 65కి బదిలీ చేయాలి℃తదుపరి దశ కోసం ముందుగా వేడిచేసిన బఫర్ PL1.

4. సరైన కిట్ ఉపయోగించకపోవడం.

సిఫార్సు: మొక్కల జన్యుసంబంధమైన DNAని సంగ్రహించడానికి మరియు శుద్ధి చేయడానికి ప్రత్యేకమైన ప్లాంట్ DNA ఐసోలేషన్ కిట్‌ను ఉపయోగించండి.

5. ఫోర్జీన్ ప్రోటీజ్ యొక్క సరికాని నిల్వ ఫలితంగా కార్యాచరణ తగ్గుతుంది లేదా నిష్క్రియం అవుతుంది.

సిఫార్సు: ఫోర్జీన్ ప్రోటీజ్ నిల్వ పరిస్థితులను నిర్ధారించండి లేదా ఎంజైమాటిక్ జలవిశ్లేషణ కోసం కొత్త ఫోర్జీన్ ప్రోటీజ్‌తో భర్తీ చేయండి.

6. ఎలుయెంట్ సమస్య

సిఫార్సు: దయచేసి ఎలుషన్ కోసం బఫర్ EBని ఉపయోగించండి;ddH ఉపయోగిస్తుంటే₂O లేదా ఇతర ఎలుయెంట్లు, ఎలుయెంట్ యొక్క pH 7.0-8.5 మధ్య ఉండేలా చూసుకోండి.

7. ఎలుయెంట్ సరిగ్గా డ్రిప్ చేయబడలేదు

సూచన: దయచేసి సిలికా పొర మధ్యలో ఎలుషన్ డ్రాప్‌ని జోడించి, ఎల్యూషన్ సామర్థ్యాన్ని పెంచడానికి గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 5 నిమిషాలు ఉంచండి.

8. ఎలుయెంట్ వాల్యూమ్ చాలా చిన్నది

సూచన: దయచేసి సూచనల ప్రకారం జెనోమిక్ DNA ఎల్యూషన్ కోసం ఎలుయెంట్‌ని ఉపయోగించండి, కనీసం 100 కంటే తక్కువ కాదుμl.

తక్కువ స్వచ్ఛతతో సంగ్రహించిన జన్యుసంబంధమైన DNA

జన్యుసంబంధమైన DNA యొక్క తక్కువ స్వచ్ఛత దిగువ ప్రయోగాల వైఫల్యం లేదా పేలవమైన ప్రభావానికి దారి తీస్తుంది, అవి: ఎంజైమ్‌ను కత్తిరించడం సాధ్యం కాదు మరియు PCR ద్వారా లక్ష్య జన్యు భాగాన్ని పొందడం సాధ్యం కాదు.

1. ఇతర ప్రోటీన్ కాలుష్యం, RNA కాలుష్యం.

విశ్లేషణ: కాలమ్ కడగడానికి బఫర్ PW ఉపయోగించబడలేదు;సరైన సెంట్రిఫ్యూగేషన్ వేగంతో నిలువు వరుసను కడగడానికి బఫర్ PW ఉపయోగించబడలేదు.

సూచన: కాలమ్ గుండా సూపర్‌నాటెంట్‌ను పంపినప్పుడు సూపర్‌నాటెంట్‌లో అవపాతం లేదని నిర్ధారించుకోవడానికి ప్రయత్నించండి;సూచనల ప్రకారం శుద్దీకరణ కాలమ్‌ను బఫర్ PWతో కడగాలని నిర్ధారించుకోండి మరియు ఈ దశను విస్మరించలేము.

2. అశుద్ధ అయాన్ కాలుష్యం.

విశ్లేషణ: బఫర్ WB వాష్ కాలమ్ విస్మరించబడింది లేదా ఒక్కసారి మాత్రమే వాష్ చేయబడింది, ఫలితంగా అవశేష అయానిక్ కాలుష్యం ఏర్పడుతుంది.

సిఫార్సు: అవశేష అయాన్‌లను వీలైనంత వరకు తొలగించడానికి సూచనల ప్రకారం బఫర్ WBతో రెండుసార్లు కడగాలని నిర్ధారించుకోండి.

3. RNase కాలుష్యం.

విశ్లేషణ: బఫర్‌కు ఎక్సోజనస్ RNase జోడించబడింది;బఫర్ PWలో సరికాని వాషింగ్ ఆపరేషన్ అవశేష RNaseకి దారి తీస్తుంది మరియు ఇన్ విట్రో ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ వంటి దిగువ RNA ప్రయోగాత్మక కార్యకలాపాలను ప్రభావితం చేస్తుంది.

సూచన: ఫోర్జీన్ సిరీస్ న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ ఎక్స్‌ట్రాక్షన్ కిట్‌లు అదనపు RNase లేకుండా RNAని తొలగించగలవు మరియు ప్లాంట్ DNA ఐసోలేషన్ కిట్‌లోని అన్ని కారకాలకు RNase అవసరం లేదు;సూచనల ప్రకారం శుద్దీకరణ కాలమ్‌ను బఫర్ PWతో కడగాలని నిర్ధారించుకోండి మరియు ఈ దశను విస్మరించలేము.

4. ఇథనాల్ అవశేషాలు.

విశ్లేషణ: బఫర్ WBతో శుద్దీకరణ కాలమ్‌ను కడిగిన తర్వాత, ఖాళీ ట్యూబ్ సెంట్రిఫ్యూగేషన్ నిర్వహించబడలేదు.

సిఫార్సు: సరైన ఖాళీ ట్యూబ్ సెంట్రిఫ్యూగేషన్ కోసం సూచనలను అనుసరించండి.

సూచన పట్టిక:

ప్లాంట్ DNA ఐసోలేషన్ కిట్ ఇన్‌స్ట్రక్షన్ మాన్యువల్