• ఫేస్బుక్
  • లింక్డ్ఇన్
  • youtube

సాంప్రదాయ రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్‌లు అధిక ఉష్ణోగ్రతలను తట్టుకోలేవు (MMLV కార్యాచరణకు సరైన ఉష్ణోగ్రత 37-50°C, మరియు AMV 42-60°C).మరింత సంక్లిష్టమైన వైరల్ RNA తక్కువ ఉష్ణోగ్రతల వద్ద cDNAలోకి ప్రభావవంతంగా రివర్స్ చేయబడదు, ఫలితంగా గుర్తింపు సామర్థ్యం తగ్గుతుంది.సాంప్రదాయ RT-qPCRకి సాధారణంగా రెండు కీ ఎంజైమ్‌ల (రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్ మరియు DNA పాలిమరేస్) భాగస్వామ్యం అవసరం, ఇది ప్రతిచర్య వ్యవస్థ యొక్క ఆపరేషన్‌ను సులభతరం చేయడం మరియు వ్యయాన్ని తగ్గించడం అసాధ్యం చేస్తుంది.ఇక్కడ మేము రెండు అధిక-ఉష్ణోగ్రత-నిరోధక రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్‌లను పరిచయం చేస్తాము, TtH మరియు RevTaq.ఈ రెండు ఎంజైమ్‌లు కూడా DNA పాలిమరేస్ పనితీరును కలిగి ఉంటాయి, కాబట్టి వాటిని బైఫంక్షనల్ ఎంజైమ్‌లు అంటారు.

TtH DNA పాలిమరేస్

థర్మోఫిలిక్ బాక్టీరియం థర్మస్ థర్మోఫిలస్ HB8 నుండి ఉద్భవించిన TtH గురించి మీరు తప్పక విని ఉంటారు.Mg2+ వంటి డైవాలెంట్ కాటయాన్‌ల సమక్షంలో, ఇది DNA పాలిమరేస్ చర్యను కలిగి ఉంటుంది.ఇది టాక్ ఎంజైమ్ వంటి PCR ప్రతిచర్యలలో విస్తృతంగా ఉపయోగించబడుతుంది, అయితే ఇది Taq ఎంజైమ్ కంటే అధిక ఉష్ణ నిరోధకతను కలిగి ఉంటుంది, కాబట్టి ఇది అధిక GC కంటెంట్ టెంప్లేట్‌లతో PCRపై మెరుగైన ప్రభావాన్ని చూపుతుంది.

· ఈ ఎంజైమ్‌కు ప్రాథమికంగా 3′→5′ ఎక్సోన్యూకలీస్ యాక్టివిటీ మరియు 5′→3′ ఎక్సోన్యూకలీస్ యాక్టివిటీ లేదు, కాబట్టి దీనిని డియోక్సీ సీక్వెన్సింగ్ కోసం కూడా ఉపయోగించవచ్చు.

· ఈ ఎంజైమ్ RTase కార్యాచరణను కలిగి ఉంది.Mn2+ సమక్షంలో, RTase కార్యాచరణ మెరుగుపరచబడుతుంది.ఈ లక్షణాన్ని ఉపయోగించి, అదే ట్యూబ్‌లో రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ రియాక్షన్ మరియు PCR రియాక్షన్‌ని నిర్వహించడానికి ఇది ఉపయోగించబడుతుంది, అంటే ఒక-దశ RT-PCR.అయితే, Mn2+ సమక్షంలో, RT-PCR యొక్క ఖచ్చితత్వం ఎక్కువగా ఉండదు.RT కార్యాచరణకు rnaase H కార్యాచరణతో సంబంధం లేదు.

· Tth-DNA పాలిమరేస్ (pH9, ఆప్టిమమ్ +55℃~+70℃, గరిష్టంగా +95℃) యొక్క పెరిగిన కార్యాచరణ RNA ద్వితీయ నిర్మాణం వల్ల కలిగే సమస్యలను అధిగమిస్తుంది.ఫలితంగా సిడిఎన్‌ఎను ఎంజి2+ అయాన్‌ల సమక్షంలో అదే ఎంజైమ్‌తో పిసిఆర్ ద్వారా విస్తరించవచ్చు.

· అధిక ఉష్ణోగ్రతల వద్ద రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ మరియు DNA యాంప్లిఫికేషన్‌ను నిర్వహించడానికి Tth-DNA పాలిమరేస్ సామర్థ్యం ఈ ఎంజైమ్‌ను సెల్యులార్ మరియు వైరల్ RNA యొక్క పరిమాణాత్మక RT-PCR, క్లోనింగ్ మరియు జన్యు వ్యక్తీకరణ విశ్లేషణకు ఉపయోగపడేలా చేస్తుంది.
RT-PCR కోసం Tth-DNA పాలిమరేస్ 1kb వరకు RNAను విస్తరించడానికి ఉపయోగించబడుతుంది.

శూన్య
 

లక్షణాలు మరియు ప్రయోజనాలు

Tth DNA పాలిమరేస్:

• ఆప్టిమైజ్ చేయబడిన పాలిమరేస్ చైన్ రియాక్షన్ (PCR) ఉత్పత్తి పరిమాణం, RT-PCR ప్రతిచర్యలో కనీసం 1000 bp ఉండేలా చూసుకోండి

• సవరించిన డియోక్సిరిబోన్యూక్లియోసైడ్ ట్రైఫాస్ఫేట్‌ను సబ్‌స్ట్రేట్‌గా అంగీకరించండి

• RNase H కార్యాచరణకు సంబంధించినది కాదు

• సమస్యలను అధిగమించడానికి అధిక ఉష్ణ స్థిరత్వాన్ని కలిగి ఉంటుంది, సాధారణంగా RNAలో ఉండే హై సెకండరీ స్ట్రక్చర్‌కు సంబంధించినది

RevTaq RT-PCR DNA పాలిమరేస్

రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్ యాక్టివిటీతో వేడి-నిరోధక DNA పాలిమరేస్

RevTaq-RT-PCR-DNA పాలిమరేస్ అనేది రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్ మరియు DNA పాలిమరేస్ కార్యకలాపాలతో నిర్దేశించిన మరియు కృత్రిమ పరిణామం ద్వారా పొందిన ఒక ఇంజినీరింగ్, అత్యంత వేడి-నిరోధకత, డ్యూయల్-ఫంక్షనల్ ఎంజైమ్.

· 95°C వద్ద RevTaq RT-PCR DNA పాలిమరేస్ సగం జీవితం 40 నిమిషాల కంటే ఎక్కువ.

· RevTaq RT-PCR DNA పాలిమరేస్ RNA టెంప్లేట్ నుండి నేరుగా అధిక-ఉష్ణోగ్రత రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్‌ను అనుమతిస్తుంది మరియు మరిన్ని cDNA టెంప్లేట్‌లను రూపొందించడానికి రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ దశను అనేకసార్లు పునరావృతం చేయవచ్చు.

RevTaq RT-PCR DNA పాలిమరేస్ "జీరో-స్టెప్" RT-PCR (ఐసోథర్మల్ రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ స్టెప్ లేదు) అనుమతిస్తుంది, ఎందుకంటే చక్రీయ PCR పొడిగింపు దశలో, రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ మరియు DNA యాంప్లిఫికేషన్ ఏకకాలంలో జరుగుతాయి.ఇది అధిక ఉష్ణోగ్రతల వద్ద రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ ప్రతిచర్యను కూడా ప్రోత్సహిస్తుంది, తద్వారా అధిక ఉష్ణోగ్రతల వద్ద RNAలోని బలమైన ద్వితీయ నిర్మాణాన్ని కరిగించడంలో ఎదురయ్యే సమస్యలను తగ్గిస్తుంది.

· ఆప్టామెర్ ఆధారిత హాట్-స్టార్ట్ ఫార్ములా కారణంగా, ఎనియలింగ్ మరియు ఎక్స్‌టెన్షన్ ఉష్ణోగ్రత 57°C కంటే ఎక్కువగా ఉన్నప్పుడు RevTaq RT-PCR DNA పాలిమరేస్ మెరుగైన ఫలితాలను అందిస్తుంది.

· ఎంజైమ్ వేడి-నిరోధకతను కలిగి ఉన్నందున, చాలా ఎక్కువ ద్రవీభవన బిందువులతో (>60°C) ప్రైమర్‌లు మరియు ప్రోబ్‌లను రూపొందించాలని సిఫార్సు చేయబడింది.

· ప్రతిచర్య సెటప్ ప్రక్రియ సమయంలో ఉష్ణోగ్రత ప్రవణత ద్వారా ఎనియలింగ్/ఎక్స్‌టెన్షన్ స్టెప్ యొక్క ఉష్ణోగ్రతను ఆప్టిమైజ్ చేయాలని సిఫార్సు చేయబడింది.

· అధిక ఉష్ణోగ్రత, PCR యొక్క ప్రత్యేకత ఎక్కువ.సాధారణంగా DNA ప్రైమర్:RNA టెంప్లేట్ హైబ్రిడైజేషన్ సాధారణంగా DNA ప్రైమర్:cDNA టెంప్లేట్ డ్యూప్లెక్స్ కంటే ఎక్కువ ద్రవీభవన స్థానం కలిగి ఉంటుంది కాబట్టి రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ సైకిల్ సాధారణంగా PCR సైకిల్ కంటే ఎక్కువ ఉష్ణోగ్రత వద్ద నిర్వహించబడుతుంది.

· RevTaq RT-PCR DNA పాలిమరేస్ జన్యుపరంగా ఇంజనీరింగ్ చేయబడింది మరియు ఆప్టిమైజ్ చేయబడింది మరియు యాంప్లికాన్ పరిమాణం 60-300 bp మధ్య ఉంటుంది.

RevTaq RT-PCR DNA పాలిమరేస్ గుర్తింపు పరిమితి 4 కాపీలకు చేరుకుంది/రెండు (2)

ఆప్టిమైజ్డ్ రియాక్షన్ సిస్టమ్ (అధిక మెల్టింగ్ పాయింట్ ప్రైమర్‌ల ఏర్పాటు) చిత్రంలో చూపబడింది.RevTaq RT-PCR DNA పాలిమరేస్-నడిచే RT-PCR TaqPath 1-స్టెప్ RT-qPCR మాస్టర్ మిక్స్ మరియు తక్కువ డిటెక్షన్ శాంపిల్ డైల్యూషన్ గ్రేడియంట్ కంటే మెరుగైన సున్నితత్వాన్ని చూపుతుంది.

మరిన్ని ప్రయోజనాలు:

త్వరిత ప్రారంభ ఫంక్షన్ → ప్రారంభ థర్మల్ డీనాటరేషన్ దశను దాటవేయవచ్చు.

హాట్-స్టార్ట్ ఆప్టామెర్ ఫార్ములా → తక్షణమే 100% ఎంజైమ్ కార్యాచరణను అందించండి మరియు తక్కువ ఉష్ణోగ్రతల వద్ద నాన్-స్పెసిఫిక్ యాంప్లిఫికేషన్‌ను నిరోధించండి (<57°C).

క్లీవేజ్ ఫంక్షన్ → RNA వెలికితీత దశ విస్మరించబడింది, ఎందుకంటే RevTaq RT-PCR DNA పాలిమరేస్ ముడి ప్రతిచర్య నమూనాలను కూడా ప్రాసెస్ చేయగలదు.ఇది వేడి RT-PCR చక్రంలో యూకారియోట్లు, బ్యాక్టీరియా మరియు వైరస్‌ల కణ త్వచాలను వెంటనే నాశనం చేయగలదు.

IVD ముడిసరుకు స్థాయి → అధిక నాణ్యత ప్రమాణాలు మరియు అత్యంత పోటీ ధరలు


పోస్ట్ సమయం: ఆగస్ట్-12-2021