శుద్దీకరణ కాలమ్ అడ్డుపడేది

ఈ కిట్‌లో, జన్యుసంబంధమైన DNA వెలికితీత ఆపరేషన్‌లో, సెంట్రిఫ్యూగేషన్ స్టెప్ లేకుండా శాంపిల్ ఎంజైమాటిక్ లైసిస్ మిశ్రమంపై శుద్దీకరణ కాలమ్ నేరుగా శోషించబడుతుంది మరియు అసంపూర్ణ ఎంజైమైజేషన్ మరియు నమూనా యొక్క అధిక స్నిగ్ధత కారణంగా శుద్దీకరణ కాలమ్ నిరోధించబడవచ్చు.

కింది సాధ్యమయ్యే కారణాలు క్రింది విధంగా ఉన్నాయి:

1. కణజాల నమూనాల అసంపూర్ణ ఎంజైమాటిక్ జీర్ణక్రియ.

సిఫార్సు: ఫోర్జీన్ ప్రోటీజ్ యొక్క నమూనా ప్రాసెసింగ్ సమయాన్ని తగిన విధంగా పొడిగించవచ్చు లేదా 5 నిమిషాల పాటు 12,000 rpm (~13,400 × g) వద్ద సెంట్రిఫ్యూగేషన్ తర్వాత సూపర్‌నాటెంట్ తీసుకోవచ్చు.

2. కణజాల నమూనాలు లేదా పెద్ద కణజాలాల అధిక వినియోగం.

సిఫార్సు: నమూనాలో 1 బుక్కల్ శుభ్రముపరచును మించకుండా ఉండటం ఉత్తమం;నమూనా చాలా పెద్దది అయినట్లయితే, బఫర్ ST1, ఫోర్జీన్ ప్రోటీజ్, బఫర్ ST2 మోతాదును పెంచండి.

3. నమూనా స్నిగ్ధత చాలా ఎక్కువగా ఉంది.

సిఫార్సు: జన్యుసంబంధమైన DNA వెలికితీతకు ముందు నమూనాలను తగిన విధంగా 10 mM Tris-HClతో కరిగించవచ్చు.

4. బ్లడ్ కార్డ్ శకలాలు పీల్చబడ్డాయి.

సిఫార్సు: బ్లడ్ స్పాట్ (FTA కార్డ్) జెనోమిక్ ఎక్స్‌ట్రాక్షన్ యొక్క 6వ దశ యొక్క తాత్కాలిక సెంట్రిఫ్యూగేషన్ సమయాన్ని తగిన విధంగా పొడిగించవచ్చు.

తక్కువ దిగుబడి లేదా DNA లేదు

నమూనా మూలం, నమూనా నిల్వ పరిస్థితులు, నమూనా తయారీ, తారుమారు మొదలైన వాటితో సహా జన్యుసంబంధమైన DNA దిగుబడిని ప్రభావితం చేసే అనేక రకాల కారకాలు తరచుగా ఉన్నాయి.

వెలికితీత సమయంలో జన్యుసంబంధమైన DNA పొందబడదు

సాధ్యమయ్యే కారణాలు క్రింది విధంగా ఉన్నాయి:

1. నమూనాల సరికాని సంరక్షణ లేదా ఎక్కువ కాలం నిల్వ చేయడం జన్యుసంబంధమైన DNA క్షీణతకు దారితీస్తుంది.

సిఫార్సు: ఓరల్ స్వాబ్‌లను తాజాగా శాంపిల్ చేయాలి మరియు జన్యుసంబంధమైన DNA వెలికితీత కార్యకలాపాల కోసం సంరక్షించబడిన శుభ్రముపరచును ఉపయోగించడం మంచిది కాదు;రక్తపు మచ్చల నమూనాలు నాణ్యతను కలిగి ఉన్నాయని నిర్ధారించుకోవాలి మరియు నిల్వ సమయం ఎక్కువ కాలం ఉండకూడదు.

2. చాలా తక్కువ కణజాల వినియోగం సంబంధిత జన్యుసంబంధమైన DNA యొక్క వెలికితీతకు దారితీయకపోవచ్చు.

సిఫార్సు: ఆపరేషన్ గైడ్‌లోని బుక్కల్ స్వాబ్ నమూనా సూచనలను అనుసరించండి మరియు సాధ్యమైనంత ఎక్కువ సార్లు తుడవండి, తద్వారా జన్యుసంబంధమైన DNA వెలికితీత కోసం నోటి శుభ్రముపరచుతో తగినంత కణాలు జతచేయబడతాయి;బ్లడ్ స్పాట్ నమూనా వెలికితీత కోసం, బ్లడ్ స్పాట్ కట్టింగ్ ప్రాంతాన్ని తగిన విధంగా పెంచవచ్చు.

3. ఫోర్జీన్ ప్రోటీజ్ సరిగ్గా సంరక్షించబడలేదు, దీని ఫలితంగా దాని కార్యాచరణ లేదా నిష్క్రియం తగ్గుతుంది.

సిఫార్సు: ఫోర్జీన్ ప్రోటీజ్ నిల్వ పరిస్థితులను నిర్ధారించండి లేదా ఎంజైమాటిక్ రియాక్షన్ కోసం కొత్త ఫోర్జీన్ ప్రోటీజ్‌తో భర్తీ చేయండి.

4. కిట్ యొక్క సరికాని సంరక్షణ లేదా నిల్వ సమయం చాలా పొడవుగా ఉంది, ఫలితంగా కిట్‌లోని కొన్ని భాగాలు విఫలమవుతాయి.

సిఫార్సు: సంబంధిత ప్రక్రియల కోసం కొత్త బుక్కల్ స్వాబ్ DNA ఐసోలేషన్ కిట్‌ను కొనుగోలు చేయండి.

5. బఫర్ WB సంపూర్ణ ఇథనాల్‌ను జోడించదు.

సిఫార్సు: బఫర్ WB సంపూర్ణ ఇథనాల్ యొక్క సరైన వాల్యూమ్‌ను జోడిస్తుందని నిర్ధారించండి.

6. సిలికాన్ ఫిల్మ్‌కి ఎలుయెంట్ సరిగ్గా జోడించబడలేదు.

సిఫార్సు: సిలికాన్ మెమ్బ్రేన్ మధ్యలో 65 °C ముందుగా వేడెక్కిన ఎలుయెంట్ చుక్కలను జోడించండి మరియు ఎలుషన్ సామర్థ్యాన్ని పెంచడానికి గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 5 నిమిషాలు వదిలివేయండి.

తక్కువ-దిగుబడి జన్యు DNA వేరుచేయబడింది

కింది సాధ్యమయ్యే కారణాలు క్రింది విధంగా ఉన్నాయి:

1. నమూనాల సరికాని సంరక్షణ లేదా ఎక్కువ కాలం నిల్వ చేయడం జన్యుసంబంధమైన DNA క్షీణతకు దారితీస్తుంది.

సిఫార్సు: ఓరల్ స్వాబ్‌లను తాజాగా శాంపిల్ చేయడం మంచిది మరియు జన్యుసంబంధమైన DNA వెలికితీత కోసం సంరక్షించబడిన స్వాబ్‌లను ఉపయోగించకూడదు.

2. కణజాల నమూనా చాలా తక్కువగా ఉంటే, సేకరించిన జన్యుసంబంధమైన DNA కంటెంట్ తక్కువగా ఉంటుంది.

సిఫార్సు: ఆపరేటింగ్ గైడ్‌లోని నోటి శుభ్రముపరచు నమూనా సూచనలను అనుసరించండి, సాధ్యమైనంత ఎక్కువ సార్లు తుడవండి, తద్వారా జన్యుసంబంధమైన DNA వెలికితీత కోసం నోటి శుభ్రముపరచుతో తగినంత కణాలు జతచేయబడతాయి.

3. ఫోర్జీన్ ప్రోటీజ్ సరిగ్గా సంరక్షించబడలేదు, దీని ఫలితంగా దాని కార్యాచరణ లేదా నిష్క్రియం తగ్గుతుంది.

సిఫార్సు: ఫోర్జీన్ ప్రోటీజ్ నిల్వ పరిస్థితులను నిర్ధారించండి లేదా ఎంజైమాటిక్ రియాక్షన్ కోసం కొత్త ఫోర్జీన్ ప్రోటీజ్‌తో భర్తీ చేయండి.

4. ఎలుయెంట్ సమస్యలు.

సిఫార్సు: ఎలుషన్ కోసం బఫర్ EBని ఉపయోగించండి;ddH ఉపయోగిస్తుంటే₂O లేదా ఇతర ఎలుయెంట్లు, ఎలుయేట్ యొక్క pH 7.0-8.5 మధ్య ఉన్నట్లు నిర్ధారించండి.

5. ఎలుయేట్ సరిగ్గా డ్రాప్ వైస్ జోడించబడలేదు.

సిఫార్సు: ఎల్యూషన్ సామర్థ్యాన్ని పెంచడానికి సిలికాన్ పొర మధ్యలో ఎలుయెంట్ చుక్కలను వేసి, గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 5 నిమిషాలు వదిలివేయండి.

6. ఎల్యూషన్ ద్రవం చాలా తక్కువగా పేరుకుపోతుంది.

సిఫార్సు: సూచనలలో అవసరమైన విధంగా జెనోమిక్ DNA ఎల్యూషన్ కోసం ఎలుయెంట్‌ని ఉపయోగించండి, కనీసం 15 μl కంటే తక్కువ కాదు.

జన్యుసంబంధమైన DNA యొక్క తక్కువ స్వచ్ఛత వేరుచేయబడింది

తక్కువ జన్యుసంబంధమైన DNA స్వచ్ఛత వైఫల్యానికి దారితీయవచ్చు లేదా దిగువ ప్రయోగాల యొక్క అసంతృప్తికరమైన ఫలితాలకు దారితీయవచ్చు, అవి: ఎంజైమ్‌లను తెరవడం సాధ్యం కాదు, PCR ఆసక్తి యొక్క జన్యు భాగాన్ని పొందదు, మొదలైనవి.

సాధ్యమయ్యే కారణాలు క్రింది విధంగా ఉన్నాయి:

1. హెటెరోప్రొటీన్ కాలుష్యం, RNA కాలుష్యం.

విశ్లేషణ: బఫర్ PW ఉపయోగించి శుద్దీకరణ కాలమ్ కడిగివేయబడలేదు;బఫర్ PW వాష్ ప్యూరిఫికేషన్ కాలమ్ సరైన సెంట్రిఫ్యూగల్ స్పీడ్‌ని ఉపయోగించి వాష్ చేయబడలేదు.

సిఫార్సు: ఇథనాల్‌ను జోడించే ముందు సూపర్‌నాటెంట్‌లో అవపాతం లేదని నిర్ధారించుకోండి;సూచనల ప్రకారం శుద్దీకరణ కాలమ్‌ను కడగాలని నిర్ధారించుకోండి మరియు ఈ దశను విస్మరించలేము.

2. అశుద్ధ అయాన్ కాలుష్యం.

విశ్లేషణ: బఫర్ WB వాష్ ప్యూరిఫికేషన్ కాలమ్ విస్మరించబడింది లేదా ఒక్కసారి మాత్రమే కడగడం వలన అవశేష అయానిక్ కాలుష్యం ఏర్పడింది.

సిఫార్సు: అవశేష అయాన్‌లను వీలైనంత వరకు తొలగించడానికి నిర్దేశించిన విధంగా బఫర్ WBని 2 సార్లు కడగాలని నిర్ధారించుకోండి.

3. RNA ఎంజైమ్ కాలుష్యం.

విశ్లేషణ: విదేశీ RNaseలు బఫర్‌కు జోడించబడ్డాయి;బఫర్ PW వాష్ ఆపరేషన్ తప్పు, ఫలితంగా RNase అవశేషాలు, ఇన్ విట్రో ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ వంటి దిగువ RNA ప్రయోగాత్మక కార్యకలాపాలను ప్రభావితం చేస్తాయి.

సిఫార్సు: ఫోర్జీన్ సిరీస్ న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ ఐసోలేషన్ కిట్‌లు RNase యొక్క అదనపు జోడింపు లేకుండా RNAని తీసివేయగలవు, అందువల్ల బుక్కల్ స్వాబ్/FTA కార్డ్ DNA ఐసోలేషన్ కిట్ RNaseని జోడించాల్సిన అవసరం లేదు;బఫర్ PW వాషింగ్ ప్యూరిఫికేషన్ కాలమ్ కోసం సూచనలను తప్పకుండా అనుసరించండి మరియు ఈ దశను విస్మరించలేము.

4. ఇథనాల్ అవశేషాలు.

విశ్లేషణ: ప్యూరిఫికేషన్ కాలమ్‌ను కడిగిన తర్వాత బఫర్ WB ఖాళీ ట్యూబ్ సెంట్రిఫ్యూగేషన్‌ను నిర్వహించలేదు.

సిఫార్సు: సూచనల ప్రకారం సరైన ఖాళీ ట్యూబ్ సెంట్రిఫ్యూగేషన్ ఆపరేషన్ చేయండి.

5. ఇతర అశుద్ధ కాలుష్యం.

విశ్లేషణ: సేవ్ చేయబడిన నమూనాలు లేదా ప్రత్యేక నమూనాలు ముందుగా చికిత్స చేయబడవు.

సిఫార్సు: సూచనల ప్రకారం నమూనాను పూర్తిగా ముందుగా చికిత్స చేయండి.